Kitapo RT qPCR mivantana amin'ny sela—Taqman Direct cell Lysis Cell Ready Ready QRT-PCR Kits Probe
Famaritana
Ity vokatra ity dia mampiasa rafitra lysis buffer tsy manam-paharoa mba hamoahana haingana ny RNA avy amin'ny santionan'ny sela kolontsaina ho an'ny fanehoan-kevitry ny RT-qPCR, manafoana ny fizotran'ny fanadiovana RNA mandany fotoana sy miasa, ary 7 minitra ihany no hahazoana ny môdely RNA ilaina, miaraka amin'ny 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman nomen'ny kitapo dia afaka mahazo vokatra haingana sy mahomby amin'ny PCR tena izy.
5 × Direct RT Mix sy 2 × Direct qPCR Mix-Taqman dia manana fandeferana mahery vaika ary afaka manao famerenana mahomby sy fanamafisana manokana amin'ny fampiasana ny lysate ny santionany ho refesina ho modely.Ny reagent dia misy Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer ary Stabilizer, izay azo ampiasaina miaraka amin'ny buffer lysis mba hamantarana haingana sy mora ny santionany, ary manana ny toetran'ny fahatsapana avo lenta, manokana ary fahamarinan-toerana.
fepetra arahana
200×20μl Rxns, 1000×20μl rxns
Kit singa
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Kit singa 20μl qPCR Reaction System | DRT-01021 | DRT-01022 | Fanamarihana | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
anjara I | Buffer CL | 4 ml | 20 ml | Lysis sela |
| Foregene Protease Plus II | 80l ny | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
anjara II | ADN Eraser | 80l ny | 400 μl | |
| 5×Mivantana RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX Reference Fandokoana | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Boky torolalana | 1 tapa | 1 tapa | ||
*:Cell Lysis, 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman dia azo vidiana misaraka
Toetra & tombony
■Tsotra sy mahomby : miaraka amin'ny teknolojia Cell Direct RT, ny santionany RNA dia azo alaina ao anatin'ny 7 minitra fotsiny.
■ Kely ny fitakiana santionany, hatramin'ny sela 10 no azo andrana.
■ Fampidirana avo lenta: afaka mamantatra haingana ny RNA ao amin'ny sela kolontsaina ao amin'ny takelaka 384, 96, 24, 12, 6-lavadrano izy.
■ ADN Eraser dia afaka manala haingana ireo génome navoaka, mampihena be ny fiantraikan'ny voka-panadinana manaraka.
■ Optimized RT sy qPCR rafitra mahatonga ny roa-dingana RT-PCR transcription mivadika ho mahomby kokoa sy PCR manokana kokoa, ary mahatohitra kokoa RT-qPCR fanehoan-kevitra inhibitors.
Fampiharana kit
Fampiharana: cellule cultié.
- RNA navoakan'ny santionany lysis: azo ampiharina amin'ny maodely RT-qPCR an'ity kitapo ity ihany.
- Ny kitapo dia azo ampiasaina amin'ireto tanjona manaraka ireto: famakafakana fanehoana ny fototarazo, fanamarinana ny vokatry ny fampanginana ny fototarazo mpanelanelana siRNA, fitiliana zava-mahadomelina, sns.
Fitehirizana sy ny fiainana talantalana
Ny ampahany I amin'ity kitapo ity dia tokony hotehirizina amin'ny 4℃;Ny ampahany II dia tokony hotehirizina amin'ny -20 ℃.
Ny Foregene Protease Plus II dia tokony hotehirizina amin'ny 4℃, aza mangatsiaka amin'ny -20 ℃.
Reagent 2×Direct qPCR Mix-Taqman dia tokony hotehirizina amin'ny -20℃ao anaty haizina;raha ampiasaina matetika dia azo tehirizina amin'ny 4 ihany koa℃ ho fitahirizana fohy (ampiasaina ao anatin'ny 10 andro).
Ny tena fotoana PCR fototra famolavolana fitsipika
Primer mandroso sy miverina
Ho an'ny PCR Real Time, ny famolavolana primer dia tena zava-dehibe.Ny Primers dia mifandray amin'ny maha-tokana sy ny fahombiazan'ny PCR amplification, ary azo namboarina miaraka amin'ireto fitsipika manaraka ireto:
- Halavany voalohany: 18-30bp.
- GC afa-po: 40-60%.
- Sanda Tm: Ny lozisialy fandrafetana voalohany, toy ny Primer 5, dia afaka manome ny sanda Tm an'ny primer.Tokony ho akaiky araka izay azo atao ny sandan'ny Tm an'ny primer ambony sy ambany.Azo ampiasaina koa ny raikipohy kajy Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Rehefa manao PCR, ny mari-pana eo ambanin'ny sandan'ny Tm voalohany amin'ny 5 °C dia voafantina amin'ny ankapobeny ho mari-pana fanalefahana (ny fitomboana mifanaraka amin'ny mari-pana fanalefahana dia mety hampitombo ny fahasamihafan'ny fihetsiky ny PCR).
- Primers sy PCR vokatra:
- Ny halavan'ny vokatra fanamafisam-peo PCR voalohany indrindra dia 100-150bp.
- Ny famolavolana primers ao amin'ny faritra ara-drafitra faharoa amin'ny môdely dia tokony hohalavirina araka izay azo atao.
- Halaviro ny fiforonan'ny fototra mifameno 2 na mihoatra eo anelanelan'ny tendrony 3′ amin'ireo primera ambony sy ambany.
- Primer 3′ terminal base dia tsy afaka manatrika miaraka amin'ny 3 fanampiny G na C misesy.
- Ny primer dia tsy afaka manana rafitra mifameno, raha tsy izany dia hiforona ny firafitry ny volo, izay misy fiantraikany amin'ny fanamafisana ny PCR.
- Ny ATCG dia tokony hozaraina araka izay azo atao amin'ny filaharana voalohany, ary ny tobin'ny terminal 3' dia tokony hohalavirina toy ny T.
Fanazavana fanampiny1:Cell DirectRT-qPCR Kit component fonosana fanampiny
1. Vahaolana Lysis Cell
| Cell Lysis Solution | |||
| Kit singa (système lysis / lavadrano 24) | Ampahany DRT-01011-A1 | Ampahany DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| anjaraaho | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| anjaraII | ADN Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Kit singa (Rafitra fanehoan-kevitra 20 μl) | Ampahany DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Kit singa (Rafitra fanehoan-kevitra 20 μl) | Ampahany DRT-01021-C1 | Ampahany DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX Reference Fandokoana | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Boky torolalana:
