Kitapo fanasan-damba RNA totalin'ny sela
Kit Description:
Ny totalin'ny ARN tena voadio sy tsara kalitao dia azo avy amin'ny sela kolontsaina isan-karazany ao anatin'ny 11 minitra.
RNase-Free
Miasa amin'ny mari-pana (15-25 ℃)
Miaraka amin'ny ADN-Cleaning Column
Ny vokatra RNA avo
Haingana: Vitao ao anatin'ny 11 minitra ny fitrandrahana
Fiarovana: Tsy misy simika organika
Description
Ity kitapo ity dia mampiasa ny tsanganana spin sy ny raikipohy novolavolain'i Foregene, izay afaka manala amin'ny fomba mahomby ny RNA totalin'ny fahadiovana sy kalitao avo lenta avy amin'ny sela novolavolaina tamin'ny takelaka 96, 24, 12, ary 6-lavadrano.
Ny kitapo dia manome ADN-Cleaning Column mahomby, izay afaka manasaraka mora foana ny supernatant sy ny lysate sela, mamatotra ary manala ny ADN génomika.Tsotra sy mitsitsy fotoana ny fandidiana.
TNy Tsanganana RNA irery ihany no afaka mamatotra ny RNA amin'ny fomba tokana tokana.Betsaka ny santionany azo karakaraina miaraka.
Kit singa
| Kit composition | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 mL | 100 mL |
| Ampidino ny buffer cRL2 | 15 mL | 60 mL |
| Buffer RW1* | 25 mL | 100 mL |
| Ampahany RW2 | 24 mL | 96 mL |
| RNase-Free ddH2O | 10 mL | 40 mL |
| Tsanganana RNA ihany | 50 | 200 |
| Tsanganana fanadiovana ADN | 50 | 200 |
| TOROMARIKA | 1 | 1 |
*Miangavy anao manao fonon-tanana ary manaova fepetra fiarovana mandritra ny fandidiana satria misy saline chaotropic mahasosotra ny Buffer cRL1 sy Buffer RW1.
Toetra & tombony
■ Ny dingana manontolo dia miasa amin'ny mari-pana (15-25 ℃), tsy misy ranomandry sy ambany hafanana centrifugation.
■ Tsy misy RNase ny kitapo manontolo, tsy mila manahy momba ny fahasimban'ny RNA.
■ Ny ADN-Cleaning Column dia mamatotra manokana ny ADN, mba hahafahan'ilay kitapo manala ny fandotoana ADN tsy misy DNase fanampiny.
■ Famokarana RNA avo lenta: Ny Tsanganana RNA ihany sy ny raikipohy tokana dia afaka manadio tsara ny RNA.
■ Haingana haingana: mora ampiasaina ary azo tanterahina ao anatin'ny 11 minitra.
■ Fiarovana: Tsy ilaina ny reagent organika.
■ kalitao avo lenta: Ny RNA voadio dia madio tsara, tsy misy proteinina sy loto hafa, ary afaka mifanena amin'ny fanandramana samihafa manaraka.
Fampiharana kit
Izy io dia mety amin'ny fitrandrahana sy fanadiovana ny totalin'ny ARN avy amin'ny sela kolontsaina ao amin'ny takelaka 96, 24, 12, ary 6-lavadrano.
Ny fandehan'ny asa
Kisary
Ny agarose gel bateria diagram ny Cell Total ARN Isolation Kit nitsabo ny ambony isan-karazany ny sela, 20μl boky elution, maka 2μl voadio total ARN 1%.
Fitehirizana sy fitehirizana
Ny kitapo dia azo tehirizina mandritra ny 12 volana amin'ny mari-pana (15-25 ℃) na 2-8 ℃ mandritra ny fotoana maharitra (24 volana).
Ny buffer cRL1 dia azo tehirizina amin'ny 4 ℃ mandritra ny 1 volana aorian'ny fampidirana 2-hydroxy-1-ethanethiol (tsy voatery).
Tsy nalaina ny ARN na ambany ny vokatra ARN
Matetika misy antony isan-karazany izay misy fiantraikany amin'ny fahombiazan'ny fanarenana, toy ny: ny votoatin'ny RNA santionan'ny sela, ny fomba fiasa, ny habetsahan'ny elution, sns.
1. Ny fandroana ranomandry na cryogenic (4 ° C) centrifugation dia natao nandritra ny fandidiana.
Soso-kevitra: miasa amin'ny mari-pana amin'ny efitrano (15-25 ° C) mandritra ny dingana manontolo, aza atao rano fandroana sy centrifuge amin'ny hafanana ambany.
2. Fitehirizana santionany tsy mety na fotoana fitehirizana santionany tafahoatra.
Soso-kevitra: Tehirizo ny santionany amin'ny -80 °C na atsobohy ao anaty ranon-javatra azota ary alaviro ny fampiasana ny fangatsiahana miverimberina;Andramo ny mampiasa sela vaovao na sela kolontsaina ho an'ny fitrandrahana RNA.
3. Tsy ampy santionany lysis.
Soso-kevitra: Rehefa manao homogenizing tissue, dia ataovy izay hahazoana antoka fa ny tavy dia homogenized ampy ary ny sela sela dia mizara ho ampy mba hanazavana ny famoahana ny ARN.
4. Tsy ampiana tsara ny eluent.
Soso-kevitra: Hamafiso fa RNase-Free ddH2O dia ampiana mitete tsikelikely eo afovoan'ny fonon'ny tsanganana fanadiovana.
5. Tsy nampidirina tao amin'ny Buffer RL2 na Buffer RW2 ny habetsaky ny ethanol tanteraka.
Soso-kevitra: Araho ny toromarika, ampio ny habetsahan'ny ethanol tanteraka marina amin'ny Buffer RL2 sy Buffer RW2 ary afangaro tsara alohan'ny hampiasana ilay kitapo.
6. Tsy mety ny fatran'ny santionan'ny tissue.
Soso-kevitra: Mampiasà tavy 10-20 mg na (1-5) × 106sela isaky ny 500 μl buffer RL1, satria ny fampiasana tavy be loatra dia mety hampihena ny fitrandrahana RNA.
7. Ny habetsahan'ny elution tsy mety na ny elution tsy feno.
Soso-kevitra: Ny habetsahan'ny elution ny tsanganana fanadiovana dia 50-200 μl;raha tsy mahafa-po ny vokatry ny elution, dia asaina manitatra ny fotoana fametrahana ny mari-pana ao amin'ny efitrano aorian'ny fampidirana RNase-Free ddH efa mafana.2O, ohatra mandritra ny 5-10 min.
8. Ny tsanganana fanadiovana dia manana sisa tavela amin'ny ethanol aorian'ny fanasana Buffer RW2.
Soso-kevitra: Raha misy sisa tavela amin'ny ethanol aorian'ny fanasan'ny Buffer RW2, ny centrifugation tsy misy na inona na inona mandritra ny 1min, ny fotoana ho an'ny fandidiana centrifugation tsy misy na inona na inona dia azo ampitomboina amin'ny 2min, na ny tsanganana fanadiovana dia azo apetraka amin'ny mari-pana amin'ny 5 min mba hanesorana ny ethanol sisa tavela.
Ny ARN voadio dia simba
Ny kalitaon'ny RNA voadio dia mifandraika amin'ny lafin-javatra toy ny fitehirizana ny santionany, ny fandotoana ny RNase, ary ny fanodikodinana, sns.
1. Tsy voatahiry ara-potoana ny santionan'ny tissue.
Soso-kevitra: Raha toa ka tsy ampiasaina ara-potoana ny santionany na ny sela aorian'ny fanangonana, dia mitahiry avy hatrany amin'ny -80 ° C na azota azota.Mba hanesorana ny RNA dia ampiasao tavy na sela vao nalaina raha azo atao.
2. Famerenana ny santionany amin'ny vata fampangatsiahana.
Soso-kevitra: Rehefa mitahiry santionany amin'ny tavy, dia tsara kokoa ny manapaka azy ireo ho tapatapaka kely mba hitehirizana azy, ary esory ny iray amin'ireo sombiny rehefa ampiasaina mba hisorohana ny fanalefahana ny santionany miverimberina sy ny fahasimban'ny ARN.
3. Ny RNase dia ampidirina na tsy manao fonon-tanana, saron-tava, sns mandritra ny fandidiana.
Soso-kevitra: Ny fanandramana fitrandrahana RNA dia tsara indrindra atao amin'ny efitrano fanodinkodinana RNA misaraka ary ny latabatra dia voadio alohan'ny fanandramana.
Manaova fonon-tanana sy saron-tava azo ampiasaina mandritra ny andrana mba hampihenana ny fahasimban'ny RNA vokatry ny fampidirana ny RNase.
4. Voaloto amin'ny RNase ny reagents mandritra ny fampiasana.
Soso-kevitra: Soloy miaraka amin'ny kitapo fitokana-monina Animal Total RNA vaovao ho an'ny fanandramana mifandraika amin'izany.
5. Ny fantsona centrifuge, toro-hevitra, sns ampiasaina amin'ny fanodinkodinana RNA dia voaloto amin'ny RNase.
Soso-kevitra: Hamarino fa ny fantsona centrifuge, toro-hevitra, pipettes, sns ampiasaina amin'ny fitrandrahana RNA dia tsy misy RNase.
Ny RNA voadio voadio dia misy fiantraikany amin'ny fanandramana midina
ARN nodiovin'ny tsanganana fanadiovana, raha ny sira ion, proteinina afa-po lehibe loatra dia hisy fiantraikany amin'ny downstream fanandramana, toy ny: mivadika transcription,Northern Blot et al.
1. Ny ARN nopotehina dia misy sisa tavela amin'ny sira.
Soso-kevitra: Hamarino fa nampidirina ao amin'ny Buffer RW2 ny habetsahan'ny ethanol marina ary manaova fanasan-damba 2 fanadiovana amin'ny hafainganam-pandeha centrifugal voalaza fa miasa;raha misy sisa tavela amin'ny sira, avelao ny tsanganana fanadiovana ao amin'ny Buffer RW2 mandritra ny 5 minitra amin'ny mari-pana amin'ny efitrano ary manaova centrifugation mba hanamafisana ny fanesorana ny loto sira.
2. Ny sisa tavela amin'ny ethanol ao amin'ny RNA elutioned.
Soso-kevitra: Hamarino fa aorian'ny fanasan'ny buffer RW2, ataovy ny fandidiana centrifugation tsy misy na inona na inona amin'ny hafainganam-pandehan'ny centrifugation voalaza ho an'ny fandidiana, hampitombo ny fotoanan'ny fandidiana fametahana fantsona tsy misy na inona na inona ho 2 min raha mbola misy sisa tavela amin'ny ethanol, na avelao amin'ny hafanan'ny efitrano mandritra ny 5 m.
