Ny fanamarinana ny fahombiazan'ny primer sy ny probe amin'ny dingana voalohany amin'ny reagents PCR ary ny famaritana ny toe-javatra mety indrindra dia ny fepetra takiana mba hiantohana ny fandrosoan'ny andrana ara-dalàna.
Ka ahoana no ilaintsika hanamafisana ny fanadihadiana voalohany amin'ny dingana voalohany?
Ny tondro lehibe dia baseline, curve amplification, sanda ct, fahombiazan'ny amplification, santionany ambany-concentration detection, CV, sns.
fototra
Ny baseline dia ny tsipika marindrano ao amin'ny curve amplification PCR.Ao amin'ny tsingerina vitsivitsy voalohany amin'ny fanehoan-kevitra fanamafisam-peo PCR, ny famantarana fluorescence dia tsy miova firy ary mamorona tsipika mahitsy.Ity tsipika mahitsy ity no tsipika fototra.
Rehefa manao fitiliana PCR primer probes, tandremo raha toa ny baseline.Ny fahadiovan'ny fatran'ny probe voalohany dia hisy fiantraikany amin'ny tsipika fototra, toy ny fampiakarana na fianjerana ny tsipika fototra.Ny baseline koa dia famantarana tena intuitive.
Amplification Curve
Ny famantarana intuitive iray hafa dia ny endriky ny curve amplification.Ny tsara indrindra dia ny manana fiolahana miendrika S mba hisorohana ny fanamafisam-peo faharoa na ny fiolahana tsy ara-dalàna hafa.
Ct sanda
Ny isan'ny tsingerina mifanandrify amin'ny teboka fihodinana manomboka amin'ny tsipika fototra mankany amin'ny fitomboan'ny exponential dia ny sandan'ny Ct.
Ho an'ny santionany iray ihany, ny probe primer samihafa dia miteraka curve amplification samihafa, ary ny sandan'ny Ct mifanaraka amin'izany dia hisy fiantraikany amin'ny fahombiazan'ny amplification sy ny fitsabahana.Amin'ny teoria, ny kely kokoa ny sandan'ny Ct amin'ny probe voalohany nofidintsika, dia tsara kokoa.
Fahavitan'ny fanamafisam-peo
Ny iray amin'ireo fomba azo antoka sy azo antoka indrindra amin'ny fanombanana ny fahombiazan'ny fanamafisana ny PCR dia ny curve mahazatra, izay fantatry ny mpikaroka ihany koa.Ny fomba dia ny fanaovana andiana santionany mba hifehezana ny isan'ny môdely kendrena.Ireo santionany ireo dia matetika atao amin'ny alàlan'ny dilution serial amin'ny vahaolana stock mifantoka, ny fampiasa matetika dia ny dilution in-10.Amin'ny fampiasana andiana santionany voatoto, mampiasa programa qPCR mahazatra mba hanamafisana ny fahazoana ny sandan'ny Cq, ary amin'ny farany dia manaova curve manara-penitra araka ny fifantohan'ny santionany tsirairay sy ny sanda Cq mifanaraka amin'izany mba hahazoana ny equation linear Cq = -klgX0 + b, ary ny fahombiazan'ny amplification E = 10 (-1 / k) -1.Rehefa mampiasa qPCR ho an'ny famakafakana quantitative, ny fahombiazan'ny amplification dia takiana amin'ny 90% -110% (3.6> k> 3.1).
Fikarohana santionany ambany
Rehefa ambany ny fatran'ny santionany, dia hafa ny tahan'ny fitiliana ireo probe voalohany.Mifidy santionany 20 mivondrona ambany izahay hamerenana azy, ary ny rafitra voalohany-probe miaraka amin'ny taham-pikarohana avo indrindra no tsara indrindra.
Coefficient of Variation (CV)
10 santionany dika mitovy dia azo tsikaritra miaraka amin'ny primer probes isan-karazany araka ny tsipika fenitry ny reagent ho an'ny nucleic asidra amplification detection.
Reagent quantitative:
araka ny marina
Ny marina ao anatin'ny andiany iray dia tokony hihaona: ny coefficient of variation (CV,%) amin'ny sanda logaritma amin'ny fifantohana fitsapana dia ≤5%.Rehefa ambany ny santionany fifantohana, ny coefficient ny fiovaovana (CV,%) ny logarithm ny detection fifantohana dia ≤10%
Qualitative reagents:
araka ny marina
Ny marina ao anatin'ny andiany iray dia tokony hifanaraka:
(1) Coefficient ny fiovan'ny sanda Ct (CV,%) ≤5%
Ny santionany mitovy dia andrana mifanandrify in-10, ary tokony hitovy ny valin'ny fitsapana
Fotoana fandefasana: Sep-18-2021
