• facebook
  • Linkedin
  • YOUTUBE

RNase dia teny saro-pady izay tsy tian'ny mpianatra maro izay matetika manao andrana fitrandrahana RNA.Nitam-piadiana tanteraka ny ARN izay nalaina tamin'ny farany niaraka tamin'ny phenol sy chloroform reagents tena misy poizina dia simba.tsy mihavana aho!!!Andeha hojerentsika anio ny niandohan'ny Rnase malaza.

Ribonuclease (RNase), na RNase, dia nokleary afaka mamadika ny ARN ho lasa molekiola kely.Ny RNase, amin'ny maha-proteinina molekiola kely, dia tsy miovaova .Ny hafanana avo mahazatra sy ny fanindronana etona avo lenta ary ny inhibitors proteinina dia tsy afaka manafoana azy tanteraka.Ny fahamarinan'ny RNase dia avy amin'ny fatoran'ny disulfide amin'ny rafitra.Ohatra, ny RNase ampiasaina amin'ny pancreas bovine dia tsy misy afa-tsy 124 amino asidra, fa misy fatorana disulfide 4.Ny fatorana solifara sy ny fatorana disulfida dia manome RNase manana fitoniana mafana tsara.Ankoatr'izay, ny rnase dia manana lanja molekiola kely ary afaka mamerina haingana ny endriny tany am-boalohany amin'ny tranga maro.

Ankoatra ny hoe tena stable,Ny RNases dia hita manerana ny laboratoara .RNase dia rafitra fiarovana biolojika.Ho an'ny sela, ny RNA exogenous dia matetika mahafaty.Raha ampitahaina amin'ny ADN exogenous, dia matetika mampidi-doza kokoa ny RNA exogenous.Ny RNA dia nadika sy nadika tamim-pifaliana, noho izany dia saika ny zavamananaina rehetra no namorona RNases mba hiarovana amin'ny fanafihan'ny RNA exogenous.Noho izany, ny sela bakteria ambolena ao amin'ny laboratoara sy ianao izay mamoaka RNA dia mamoaka ny fofon'ny RNase.Ny ranon'ny vatan'olombelona (rora, ranomaso, sns) dia misy RNase betsaka, koa aza mitomany rehefa simba ny ARN.Arakaraky ny hitomany no vao mainka mihasimba ny ARN!!Rahavavy Daiyu dia tsy mety amin'ny fitrandrahana RNA!

Ankoatra izany, misy RNase be dia be koa ny hoditrao marefo, ary misy RNase koa ny marika, ny pipettes, ny varavaran'ny vata fampangatsiahana ary ny tahony varavarana izay nokasihan'ny hoditra.

Miaraka amin'ny fitabatabana be dia be, andeha hojerentsika ny fomba hiatrehana ny RNases.

Ny zavatra voalohany eritreretin'ny rehetra rehefa manala RNA diaDEPC(diethyl pyrocarbonate).DEPC no tena denature ny proteinina amin'ny fampifangaroana amin'ny peratra imidazole amin'ny histidine vondrona mavitrika RNase, ka manakana ny asan'ny enzyme.Ny DEPC 0,1% dia afaka manana fiantraikany tsara kokoa amin'ny fanesorana ny Rnase, saingy mila mitandrina isika fa ny DEPC dia carcinogen fantatra, ka tokony hojerena manokana ny fampiasana azy.

Ho an'ny RNase, mila manomboka amin'ny lafiny roa isika,Ny voalohany dia ny manakana ny asan'ny endogenous RNase

Ny reagents fitrandrahana RNA mahazatra toy ny guanidine isothiocyanate sy DTT voarakitra ao amin'ny Trizol dia afaka manokatra ny fatorana disulfide amin'ny RNase, saingy mbola misy RNases sasany, indrindra amin'ny santionan'ny sela, ka tandremo ny hafanana ambany.

1.Atsoboka avy hatrany amin'ny azota ranon-javatra ny santionan'ny tavy rehefa avy nesorina, na ao anaty vahaolana fitehirizana RNA ara-barotra.

2.Aorian'ny fanesorana ny RNA amin'ny santionan'ny sela, ampio amin'ny vahaolana lysis izany ary asio azy eo amin'ny boaty gilasy

3. Tena tsara ny mampiasa azota ranon-javatra ho an'ny fitotoana rehefa homogenized ny santionan'ny tissue.Rehefa mampiasa homogenizer elektrika tsy misy azota ranon-javatra, tandremo tsara ny fampangatsiahana tanteraka ny adaptatera homogenate.

sgre (2)

Ny faharoa dia DNase exogenous

1.Mitadiava fitaovam-piadiana feno, manao palitao laboratoara, manao saron-tava, ary ataovy tsara ny manao fonon-tanana vaovao (aza mitsitsitsitsitsy e!! Marihina fa ny Trizol dia tena simba tanteraka, ary matanjaka be koa amin'ny alalan'ny fonon-tanana, ka aza mitete amin'ny tananao).

2.Ny toro-hevitra pipette ampiasaina rehetra, fantsona EP, fantsona PCR ary fitaovana hafa dia tsy maintsy tsaboina de-RNase.Azo atsoboka ao anaty 0.1% DEPC izy io ary avy eo manindry amin'ny tsindry ambony.Tandremo ny fandidiana ao amin'ny fume hood.Ny mpanao jadona eo an-toerana dia afaka mividy mivantana ny zavatra azo ampiasaina hanesorana ny enzymes.

PS: Mamelà ahy hilaza aminao fomba kamo.Na dia tsy afaka manala tanteraka ny RNase aza ny mari-pana ambony sy ny tsindry ambony, dia hanala ny ampahany betsaka amin'izany.In-2 ny mari-pana ambony sy ny tsindry ambony dia misy fiantraikany tsara, ary ny fitrandrahana ny ARN dia misy fiantraikany kely.

3.Ny toaka dia afaka manimba ny proteinina,ka ny latabatra fitrandrahana RNA dia azo kosehina amin'ny alikaola 75%. , ary ny fonon-tanana ihany koa dia azo asiana alikaola.

4.Ny vahaolana farany famongorana RNA sy fantsona centrifuge dia tokony hotsaboina de-RNase ihany koa.Ny rano DEPC dia vahaolana famongorana ny ARN.Andeha isika hiresaka momba ny fomba fanomanana marina ny rano DEPC (tadidio ny hamerina ny DEPC ara-barotra rehefa mividy izany)

Ampio ny DEPC amin'ny rano ultrapure amin'ny 1:1000, kobanina tsara, avelao hijoro mandritra ny alina amin'ny 37 ° C, ary sterilize amin'ny 121 ° C amin'ny hafanana ambony sy ny tsindry mafy mandritra ny 15 minitra.Ny rano DEPC dia azo tehirizina amin'ny -20 ° C amin'ny aliquots 1ml.

Farany, raha fintinina: ny mari-pana ambany no zava-dehibe, karakaraina tsara ny entana azo ampiasaina, mitam-piadiana feno ary tsy dia be resaka!

Eny ary, izay ihany ny paik'ady androany.Mirary anao aho ny fifantohana sy ny fahadiovana RNA rehetra nolazainao.Samy A260/A280 dia 2.0!!!

Mazava ho azy, raha mampiasa aFampandehanana mari-pana ao amin'ny efitrano RNA fitrandrahana fitaovana, mety tsy tojo ireo olana voalaza etsy ambony ireo ianao.

Ny fandidiana amin'ny mari-pana ao amin'ny efitrano, tsy misy DNase, dia manala ny RNA manontolo avy amin'ny sela ao anatin'ny 11 minitra, ary manala ny RNA manontolo avy amin'ny tavy na zavamaniry ao anatin'ny 30 minitra.

Ho an'ny santionany fitsapana dia mifandraisa amin'ny:overseas@foregene.com

Vokatra mifandraika:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/

sgre (1)sgre (3)


Fotoana fandefasana: Aug-25-2022