Ny PCR Real Time, fantatra ihany koa amin'ny hoe PCR quantitative na qPCR, dia fomba fanaraha-maso sy famakafakana ny vokatra PCR amin'ny fotoana tena izy.
Satria ny PCR quantitative dia manana tombony amin'ny fandidiana tsotra, haingana sy mety, fahatsapana avo lenta, famerenana tsara, ary tahan'ny fandotoana ambany, dia be mpampiasa amin'ny fitsapana ara-pitsaboana, fanombanana ny fahombiazan'ny zava-mahadomelina, fikarohana fanehoana ny fototarazo, fikarohana transgenika, fitiliana ny fototarazo, fitiliana ny pathogen, fitiliana biby sy zavamaniry., fitiliana sakafo sy sehatra hafa.
Noho izany, na manao fikarohana fototra amin'ny siansa momba ny fiainana ianao, na mpiasa amin'ny orinasa pharmaceutique, orinasa fiompiana, orinasa sakafo, na mpiasa amin'ny fisafoana fidirana sy biraon'ny confinement, sampana fanaraha-maso ny tontolo iainana, hopitaly ary sampana hafa, dia ho mora voan'ny aretina ianao.

Fitsipiky ny PCR Real Time

Ny PCR Real Time dia fomba iray izay ampidirina amin'ny rafitra fanehoan-kevitry ny PCR ny akora fluorescent, ary ny hamafin'ny famantarana ny fluorescence amin'ny dingan'ny fanehoan-kevitry ny PCR dia manara-maso amin'ny fotoana tena izy amin'ny alàlan'ny fitaovana PCR be dia be, ary amin'ny farany ny angon-drakitra andrana dia nodinihina sy nokarakaraina.

【Curve fanamafisam-peo】dia ny curve mamaritra ny fizotry ny PCR.Ny curve amplification an'ny PCR dia tsy curve exponential mahazatra, fa curve sigmoid.

[Dingan'ny sehatra amin'ny curve amplification]Miaraka amin'ny fitomboan'ny isan'ny tsingerin'ny PCR, ny tsy fampandehanana ny ADN polymerase, ny fihenan'ny dNTPs sy ny primers, ary ny fanakanana ny fanehoan-kevitry ny synthesis amin'ny alàlan'ny pyrophosphate amin'ny vokatra, sns., Ny PCR dia tsy mivelatra foana., ary hiditra amin'ny lembalemba amin'ny farany.

[Faritra fitomboana mihoa-pampana amin'ny curve fanamafisam-peo]Na dia miovaova be aza ny dingana lembalemba, any amin'ny faritra sasany amin'ny faritra fitomboan'ny exponential amin'ny curve fanamafisam-peo, dia tena tsara ny fiverimberenana, izay tena zava-dehibe amin'ny famakafakana ny PCR.

[Sanda tokonam-baravarana sy sanda Ct]Nametraka ny sandan'ny fetran'ny fitiliana fluorescence izahay amin'ny toerana mety amin'ny faritry ny fitomboan'ny exponential amin'ny curve amplification, izany hoe ny sandan'ny tokonam-baravarana (Threshold).Ny fihaonan'ny sandan'ny tokonam-baravarana sy ny curve fanamafisam-peo dia ny sanda Ct, izany hoe ny sanda Ct dia manondro ny isan'ny tsingerina (Threshold Cycle) rehefa tratra ny sandan'ny tokonam-baravarana.

Ny tabilao etsy ambany dia mampiseho mazava tsara ny fifandraisana misy eo amin'ny tsipika tokonam-baravarana sy ny curve amplification, ny tokonam-baravarana ary ny sandan'ny Ct.

【Ahoana no hamantarana?】

Noporofoin'ny teoria matematika fa ny sandan'ny Ct dia manana fifandraisana tsipika mifanohitra amin'ny logaritma amin'ny isan'ny môdely voalohany.Ny PCR Real Time dia manara-maso ny vokatra fanamafisam-peo PCR amin'ny fotoana tena izy ary manombana azy ireo mandritra ny dingana fanamafisam-peo.

Isaky ny tsingerin'ny PCR, ny ADN dia nitombo avo roa heny, ary vetivety dia tonga tany amin'ny lembalemba.

Raha heverina fa ny habetsahan'ny ADN manomboka dia A₀ , aorian'ny tsingerina n, ny habetsahan'ny vokatra ADN dia azo aseho toy izao:

A _n =A ₀ ×2ⁿ

Avy eo, arakaraky ny habetsahan'ny ADN voalohany A 0, dia haingana kokoa ny habetsahan'ny vokatra nohamafisina tonga amin'ny sandan'ny fitiliana An , ary ny isan'ny tsingerina rehefa mahatratra An dia ny sanda Ct.Izany hoe, arakaraky ny habetsahan'ny ADN voalohany A 0 no miakatra aloha ny curve amplification, ary kely kokoa ny isan'ny tsingerina ilaina n.

Manatanteraka ny dilution gradient amin'ny fenitry ny fifantohana fantatra izahay ary mampiasa azy io ho modely ho an'ny PCR Real Time, ary misy andian-tsipìka fanamafisam-peo ho azo amin'ny elanelana mitovy amin'ny filaharana manomboka ny habetsahan'ny ADN manomboka amin'ny kely kokoa.Araka ny fifandraisana linear eo amin'ny sanda Ct sy ny logaritma amin'ny isan'ny modely fanombohana, a[curve manara-penitra] dia azo noforonina .

Amin'ny fanoloana ny sandan'ny Ct amin'ny santionany amin'ny fifantohana tsy fantatra amin'ny curve mahazatra, dia azo alaina ny habetsaky ny santionany voalohany amin'ny santionany tsy fantatra, izay ny fitsipiky ny PCR Real Time.

Fomba fitiliana ny Real Time PCR

Ny PCR Real Time dia mahita ny vokatra fanamafisam-peo PCR amin'ny alàlan'ny fahitana ny hamafin'ny fluorescence ao amin'ny rafitra fanehoan-kevitra.

Fitsipika momba ny fomba fametahana loko fluorescent】

Fandokoana fluorescent, toy ny TB Green ® , dia afaka mamatotra tsy voafaritra amin'ny ADN misy tady roa ao amin'ny rafitra PCR ary mipoitra rehefa mifamatotra.

Ny hamafin'ny fluorescence ao amin'ny rafitra fanehoan-kevitra dia nitombo be tamin'ny fitomboan'ny tsingerin'ny PCR.Amin'ny fijerena ny hamafin'ny fluorescence, ny habetsahan'ny fanamafisan'ny ADN ao amin'ny rafitra fanehoan-kevitra dia azo araha-maso amin'ny fotoana tena izy, ary avy eo ny habetsahan'ny môdely fanombohana ao amin'ny santionany dia azo tombanana mivadika.

【Ny fitsipiky ny fomba fitiliana fluorescent】

fluorescent probedia filaharana asidra nokleika misy vondrona fluorescent amin'ny faran'ny 5′ ary vondrona mamono amin'ny faran'ny 3′, izay afaka mifatotra manokana amin'ny môdely.Rehefa tsy voafehy ny probe, ny fluorescence avoakan'ny fluorophore dia vonoina amin'ny vondrona famonoana ary tsy afaka mi-fluoresce.Rehefa simba ny probe dia hisaraka ny akora fluorescent ary hamoaka fluorescence.

Misy probe fluorescent ampiana amin'ny vahaolana fanehoan-kevitra PCR.Mandritra ny dingan'ny fanodinana, ny probe fluorescent dia hamatotra amin'ny toerana manokana amin'ny môdely.Mandritra ny fizotran'ny fanitarana, ny hetsika exonuclease 5′→3′ an'ny anzima PCR dia afaka manimba ny probe fluorescent hybrid miaraka amin'ny môdely, ary misaraka ny akora fluorescent mba hamoahana fluorescence.Amin'ny alàlan'ny fahitana ny hamafin'ny fluorescence ny probe ao amin'ny rafitra fanehoan-kevitra, ny tanjona amin'ny fanaraha-maso ny habetsaky ny fanamafisana ny vokatra PCR dia azo tratrarina.

【Fifantenana ny fomba fitiliana fluorescence】

Raha ampiasaina hanavaka ny filaharana misy homôlôjia avo lenta ary manao fitiliana PCR multiplex toy ny famakafakana fanoratana SNP, dia tsy azo soloina ny fomba fitiliana fluorescent.
Ho an'ny fanandramana PCR Real Time hafa dia azo ampiasaina ny fomba chimera fluorescent tsotra sy mora ary mora ampiasaina.

probesSpecialité matanjaka, mahavita PCR multiplex

toetra izy

Fepetra manokana ho an'ny fanamafisana;

tsy azo atao ny PCR multiplex Mila mamolavola probe manokana, lafo vidy;

indraindray sarotra ny famolavolana probe

Vokatra mifandraika: