• facebook
  • Linkedin
  • YOUTUBE

Famoronana revolisionera maro teo amin'ny tantaran'ny teknolojia detection ao an-tsaiko dia teknolojia immunolabeling mifototra amin'ny foto-kevitry ny antigène-antibody manokana mamatotra, ny PCR teknolojia sy ny sequencing teknolojia.Androany dia hiresaka momba ny teknolojia PCR isika.Araka ny fivoaran'ny teknolojia PCR, zatra mizara ny teknolojia PCR ho taranaka telo ny olona: ny teknolojia PCR mahazatra, ny tena-fotoana fluorescent quantitative teknolojia PCR sy nomerika PCR teknolojia.

Common PCR teknika

w1

KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)

Kary Mullis no namorona ny polymerase chain reaction (polymerase chain reaction , PCR) tamin'ny 1983. Voalaza fa rehefa nitondra ny sipany izy dia nahazo aingam-panahy tampoka ary nieritreritra ny fitsipiky ny PCR (ny tombony amin'ny fiara).Nahazo ny loka Nobel momba ny simia i Kary Mullis tamin’ny 1993. Hoy ny New York Times: “Tena tany am-boalohany sy manan-danja, saika mizara ny biôlôjia ho vanim-potoana talohan’ny PCR sy taorian’ny PCR.

Ny fitsipiky ny PCR: Eo ambanin'ny catalyse ny ADN polymerase, ny ADN strand reny dia ampiasaina ho modely, ary ny primer manokana dia ampiasaina ho toy ny teboka fanombohana ny fanitarana, ary ny ADN strand vavy mifameno amin'ny ADN mody reny dia adika in vitro amin'ny alàlan'ny denaturation, annealing, fanitarana ary dingana hafa.Izy io dia teknolojia fanamafisam-peo ADN in vitro, izay afaka manamafy haingana sy manokana izay ADN kendrena in vitro.

w2

Ny tombony amin'ny PCR mahazatra
1.Fomba klasika, fenitra iraisam-pirenena sy an-trano feno
2.Vidin'ny fitaovana reagents ambany kokoa
3.Ny vokatra PCR dia azo averina amin'ny andrana biolojia molekiola hafa
Masinina PCR Foregene atolotra: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Vokatra mifandraika: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Ny tsy fahampian'ny PCR mahazatra
1.mora mandoto
2.asa sarotra
3.analyse qualitative ihany
4.Fahatsapana antonony
5.Misy fanamafisam-peo tsy voafaritra, ary rehefa mitovy habe amin'ny tarika kendrena ny tarika tsy voafaritra dia tsy azo avahana.
 
CApillary electrophoresis-based PCR
Ho setrin'ny tsy fahampian'ny PCR mahazatra, ny mpanamboatra sasany dia nampiditra fitaovana mifototra amin'ny fitsipiky ny electrophoresis capillary.Ny dingana electrophoresis aorian'ny fanamafisana ny PCR dia vita ao amin'ny kapila.Ny fahatsapan-tena dia avo kokoa, ary ny fahasamihafan'ny fototra maromaro dia azo avahana ary ny fanamafisana dia azo kajy amin'ny MAERKER.votoatin'ny vokatra.Ny tsy fahampiana dia ny vokatra PCR dia mbola mila sokafana sy ampidirina ao anatin'ilay fitaovana, ary mbola atahorana ho voan'ny loto.

w3

CapillaryElectrophoresis

 

2. Teknolojia PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR)Fluorescent quantitative PCR, antsoina koa hoe Real-Time PCR, dia teknolojia fatran'ny asidra nokleika vaovao novolavolain'ny PE (Perkin Elmer) tamin'ny 1995. Ny tantaran'ny fivoaran'ny PCR fluorescent quantitative dia tantaran'ny tolona manetsika fanahy ataon'ireo goavambe toa ny ABI, Roche, ary Bio-Rad.Raha liana ianao dia afaka manamarina izany.Ity teknika ity no teknika PCR semi-quantitative indrindra sy be mpampiasa indrindra amin'izao fotoana izao.

Masinina qPCR atolotra: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/

Fomba fandokoana fluorescent (SYBR Green I):SYBR Green I no loko mamatotra ADN fampiasa matetika indrindra ho an'ny PCR quantitative, izay mamatotra tsy manokana amin'ny ADN misy tady roa.Ao amin'ny fanjakana malalaka, ny SYBR Green dia mamoaka fluorescence malemy, fa rehefa mifamatotra amin'ny ADN misy tady roa, dia mitombo avo 1000 heny ny fluorescence.Noho izany, ny totalin'ny famantarana fluorescent avoakan'ny fanehoan-kevitra dia mifanandrify amin'ny habetsahan'ny ADN misy tady roa ary hitombo amin'ny fitomboan'ny vokatra ampitomboina.Koa satria ny loko dia mamatotra tsy manokana amin'ny ADN misy tady roa, dia mety hiteraka vokatra tsara diso.

Vokatra mifandraika: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/

Fomba fitiliana fluorescent (teknolojia Taqman): Nandritra nyFanamafisana PCR, probe fluorescent manokana dia ampiana miaraka amin'ny primers.Ny probe dia oligonucleotide tsipika, miaraka amin'ny vondrona mpanao gazety fluorescent sy vondrona mpamono fluorescent izay misy marika eo amin'ny tendrony roa.Rehefa tsy voafehy ny probe, ny famantaran'ny fluorescent navoakan'ny vondrona mpanangom-baovao dia entin'ny vondrona quencher, ary ny fahitana Tsy misy famantarana fluorescent;mandritra ny fanamafisam-peo PCR (eo amin'ny sehatra fanitarana), ny hetsika 5'-3' Dicer an'ny Taq enzyme dia handevona sy hanimba ny probe, ka misaraka ny vondrona fluorescent mpanao gazety sy ny vondrona fluorescent quencher, mba hahafahan'ny rafitra fanaraha-maso fluorescence Ny famantarana fluorescent dia azo raisina, izany hoe, isaky ny ampitomboina ny rojom-pandrefesana ADN, ny molekiolan'ny fluorescent sy ny fambara feno dia miforona ny molekiolan'ny fluorescent sy ny famantarana. fananganana vokatra PCR.Ny fomba fitiliana Taqman no fomba fitiliana matetika indrindra amin'ny fitiliana klinika.

Vokatra mifandraika: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/

w4

Ny tombony amin'ny qPCR
1.Ny fomba dia matotra ary feno ny fitaovana sy ny reagents
2.Vidin'ny reagents antonony
3.mora ampiasaina
4.Avo saro-pady sy manokana
 
Ny tsy fahampian'ny qPCR

Ny fiovan'ny fototarazo kendrena dia mitarika tsy hita.
Tsy azo fantarina ny valin'ny fizahana ny môdely misy fifantohana ambany.
Misy lesoka lehibe rehefa mampiasa ny curve mahazatra ho an'ny fitiliana quantitative.
 
3. Teknolojia PCR nomerika (PCR nomerika, dPCR).
Ny PCR nomerika dia teknika amin'ny fanisana tanteraka ny molekiola asidra nokleika.Raha ampitahaina amin'ny qPCR, ny PCR nomerika dia afaka mamaky mivantana ny isan'ny molekiolan'ny ADN/RNA, izay ny fandrefesana tanteraka ny molekiola asidra nokleika ao amin'ny santionany fanombohana.Tamin'ny 1999, Bert Vogelstein sy Kenneth W. Kin-zler dia nanolotra tamin'ny fomba ofisialy ny foto-kevitry ny dPCR.
 
Tamin'ny 2006, Fluidigm no voalohany namokatra fitaovana dPCR mifototra amin'ny chip.Tamin'ny taona 2009, nanangana ny rafitra OpenArray sy QuantStudio 12K Flex dPCR ny Life Technologies.Tamin'ny taona 2013, nanangana ny rafitra QuantStudio 3DdPCR ny Life Technologies, izay mampiasa teknolojia chip microfluidic nanoscale avo lenta mba hizarana santionany amin'ny sela tsirairay 20,000.amin'ny fanehoan-kevitra tsara.

w5

Tamin'ny taona 2011, ny Bio-Rad dia namoaka ny fitaovana QX100 dPCR miorina amin'ny vongan-drano, izay mampiasa teknôlôjia amin'ny rano amin'ny solika mba hizarana mitovy ny santionany amin'ny rano 20,000 mitete-drano-in-menaka, ary mampiasa mpandinika vongan-drano handinihana ireo vongan-drano.Tamin'ny taona 2012, ny RainDance dia namoaka ny fitaovana RainDrop dPCR, entin'ny entona avo lenta, mba hizarana ny rafitra fanehoan-kevitra manara-penitra ho lasa emulsion fanehoan-kevitra misy 1 tapitrisa ka hatramin'ny 10 tapitrisa micro-droplets avo lenta.

w6

Hatreto, ny PCR dizitaly dia namorona vondrona roa lehibe, karazana chip sy karazana droplet.Na inona na inona karazana PCR nomerika, ny fitsipika fototra dia mametra ny dilution, ny PCR endpoint ary ny fizarana Poisson.Ny rafitra fanehoan-kevitra PCR manara-penitra misy molekiola asidra nokleika dia mizara mitovy amin'ny fanehoan-kevitra PCR an'aliny, izay zaraina amin'ny poti-potika na microdroplets, ka ny fanehoan-kevitra tsirairay dia misy molekiola môdely araka izay azo atao, ary ny fanehoan-kevitra PCR molekiola tokana dia atao.Amin'ny famakiana ny fluorescence Ny fisiana na ny tsy fisian'ny famantarana dia isaina, ary ny quantification tanteraka dia atao aorian'ny calibration ny fizarana Poisson statistika.

Ireto manaraka ireto ny toetran'ny sehatra PCR nomerika maromaro nampiasaiko:

1. Bio-Rad QX200 droplet digital PCR Bio-RadQX200 dia sehatra PCR nomerika tena mahazatra, ny fizotran'ny fizahana fototra: santionany 20,000 no vokarin'ny mpamokatra droplet Ny rano-in-solika dia ampitomboina amin'ny milina PCR mahazatra, ary farany ny famantarana fluorescence isaky ny micro-droplet dia vakian'ny mpamaky micro-droplet.Sarotra kokoa ny fandidiana, ary antonony ny mety hisian'ny fandotoana.

w7

Xinyi TD1 micro-droplet digital PCRXinyi TD1 dia sehatra PCR nomerika an-trano, ny fizotran'ny fizahana fototra: mamokatra rano 30,000-50,000 mitete rano amin'ny menaka amin'ny alàlan'ny mpamokatra vongan-drano, manamafy amin'ny fitaovana PCR mahazatra, ary farany mandalo Ny mpamaky droplet dia mamaky ny famantarana fluorescent isaky ny droplet.Na ny famokarana vongan-drano sy ny famakiana amin'ity sehatra ity dia atao ao anaty puce natokana ho an'ny fandotoana kely.

w8

 STILLA Naica micro-droplet chip digital PCRSTILLA Naica dia sehatra PCR nomerika vaovao.Ny dingan'ny fikarohana fototra dia: ampio ny vahaolana fanehoan-kevitra amin'ny puce, apetraho ao amin'ny rafitra famokarana micro-droplet sy rafitra fanamafisam-peo ny chip, ary miteraka 30,000 micro-droplets.Miparitaka amin'ny puce, ary vita amin'ny puce ny fanamafisana ny PCR.Avy eo dia afindra any amin'ny rafitra famakafakana famakafakana micro-droplet ny puce amplified, ary vakiana amin'ny fakana sary ny famantarana fluorescent.Satria ao anaty puce mihidy ny dingana manontolo, dia kely ny mety hisian'ny loto.

w9

4. ThermoFisher QuantStudio 3D chip digital PCR

ThermoFisher QuantStudio 3D dia sehatra PCR nomerika hafa mifototra amin'ny chip.Ny dingana voalohany amin'ny fitadiavana azy dia: ampio ny vahaolana fanehoan-kevitra ao amin'ny spreader, ary aparitaho amin'ny chip miaraka amin'ny microwells 20.000 amin'ny alalan'ny spreader ny vahaolana fanehoan-kevitra., apetraho amin'ny milina PCR ny puce mba hanamafisana, ary apetraho amin'ny mpamaky ny puce farany ary alaivo sary hamakiana ny famantarana ny fluorescent.Ny fandidiana dia somary sarotra, ary ny dingana rehetra dia atao amin'ny chip mihidy, ary ambany ny mety hisian'ny loto.

w10

5. JN MEDSYS Clarity chip digital PCR

JN MEDSYS Clarity dia sehatra PCR nomerika karazana chip vaovao.Ny fizotry ny fikarohana fototra dia: ampio ny vahaolana fanehoan-kevitra ao amin'ny applicator, ary manaparitaka ny vahaolana amin'ny fanehoan-kevitra mitovy amin'ny fantsona PCR 10,000 napetraka ao amin'ny fantsona PCR amin'ny alàlan'ny applicator.Ao amin'ny chip microporous, ny vahaolana fanehoan-kevitra dia miditra ao amin'ny chip amin'ny alàlan'ny hetsika kapila, ary ny fantsona PCR miaraka amin'ny chip dia apetraka eo amin'ny milina PCR ho fanamafisana, ary farany ny chip dia apetraka ao amin'ny mpamaky hamaky ny famantarana fluorescent amin'ny fakana sary.Sarotra kokoa ny fandidiana.Kely ny mety hisian'ny loto.

w11

Ny mason'ny sehatra PCR nomerika tsirairay dia fintinina toy izao manaraka izao:

w12

Ny tondro fanombanana ny sehatra PCR dizitaly dia: ny isan'ny vondrona mizara, ny isan'ny fantsona fluorescent, ny fahasarotan'ny fandidiana ary ny mety hisian'ny loto.Fa ny tena zava-dehibe dia ny fahitana ny marina.Ny fomba iray hanombanana ny sehatra PCR nomerika dia ny fampiasana sehatra PCR nomerika maromaro hifampizarana, ary ny fomba iray hafa dia ny fampiasana akora manara-penitra misy sanda marina.

Ny tombony amin'ny dPCR
1.Fanatrarana fatra tanteraka
2.Sarobidy kokoa sy manokana
3.Afaka mamantatra santionany dika mitovy ambany
Ny tsy fahampian'ny dPCR1. Fitaovana lafo vidy sy reagents 2. Fampandehanana sarotra sy fotoana lava hitadiavana 3. Fahitana ety

Amin'izao fotoana izao, manana ny tombony sy ny fatiantoka ny taranaka telo amin'ny teknolojia PCR, ary samy manana ny sehatra fampiharana azy manokana, ary tsy fifandraisana izany no manolo ny taranaka iray.Ny fandrosoan'ny teknolojia tsy mitsaha-mitombo dia nanindrona hery vaovao ho amin'ny teknolojia PCR, ahafahany manokatra ny toromarika fampiharana iray, ka mahatonga ny fitiliana asidra nokleika ho mora sy marina kokoa.
Loharano: Entin'i Dr. Yuan hanao fitiliana ianao
 
Recommended Products:


Fotoana fandefasana: Nov-18-2022