Fanaterana ny toro-hevitra pipette sy ny fantsona EP, sns.
1. Manomàna DEPC (zavatra tena misy poizina) 0,1% miaraka amin'ny rano deionized, ampiasao tsara ao anaty vata fampangatsiahana izany, ary tehirizo ao amin'ny 4 ° C lavitra ny hazavana;
Ny rano DEPC dia rano madio tsaboina amin'ny DEPC ary sterilized amin'ny hafanana ambony sy ny tsindry ambony.Notsapaina fa tsy misy RNase, DNase ary proteinase.
2. Apetraho ao anaty 0.1% DEPC ny tendron'ny pipette sy ny fantsona EP, ary ataovy azo antoka fa feno 0.1% DEP ny tendron'ny pipette sy ny EP.
3. Arovy amin'ny hazavana, avelao hijanona, mandritra ny alina (12-24h)
4. Ny boaty misy ny tendrony sy ny fantsona EP dia tsy mila asiana DEPC.Aorian'ny fanesorana ny rano DEPC amin'ny tendrony na ny fantsona EP, dia ento ary fonosy.
5. 121 degre Celsius, 30 min
6. 180 degre Celsius, maina mandritra ny ora maromaro (ora 3 farafahakeliny)
Fanamarihana : a.Manaova fonon-tanana sy saron-tava latex rehefa mikarakara DEPC!b, na tsy misy DEPC sterilization, 130 ℃, 90min autoclave (laboratoara maro ny mari-pana sterilization in-droa)
Fandinihana ny fitrandrahana RNA
Toe-javatra roa lehibe amin'ny tsy fahombiazan'ny fitokana-monina RNA
Ny fahasimban'ny ARN sy ny sisa tavela amin'ny loto ao amin'ny tavy,momba ny fahapotehana, andeha hojerentsika aloha hoe nahoana no tsy mora simba ny ARN nalaina tao amin'ny sela kolontsaina.Ny reagents fitrandrahana RNA efa misy dia misy singa manakana haingana ny RNase.Ampio ny lysate amin'ny sela efa kolontsaina, ary afangaro fotsiny, ny sela rehetra dia azo afangaro tsara amin'ny lysate, ary ny sela dia lysed tanteraka.Aorian'ny lysed ny sela, ny akora mavitrika ao amin'ny lysate dia manakana avy hatrany ny RNase intracellular, noho izany dia mijanona ho tsy misy dikany ny ARN.Izany hoe, satria mora sy tanteraka mifandray amin'ny lysate ny sela kolontsaina, dia tsy mora simba ny ARN-ny;amin'ny lafiny iray, ny ARN ao amin'ny sela dia mora simba satria ny sela ao amin'ny sela dia tsy mora mifandray haingana amin'ny lysate.noho ny fifandraisana ampy.Noho izany,Raha heverina fa misy fomba iray hamadihana ny tavy ho sela tokana nefa manakana ny asan'ny ARN, dia mety ho voavaha tanteraka ny olan'ny fahasimbana.
Ny fikosoham-bary azota azota no fomba mahomby indrindra amin'izany.Na izany aza, ny fomba fikosoham-bary azota azota dia tena manahirana, indrindra rehefa be ny isan'ny santionany.Izany no nahatonga ny zavatra tsara indrindra manaraka: ny homogenizer.nyhomogenizerNy fomba dia tsy mandinika ny fanontaniana momba ny fomba hanakanana ny asan'ny RNase alohan'ny hifandraisana amin'ny sela amin'ny lysate, fa mivavaka kosa fa ny tahan'ny fikorontanan'ny sela dia haingana kokoa noho ny tahan'ny RNase intracellular manimba ny RN.
Ny fiantraikan'ny homogenizer elektrika dia tsara kokoa,ary ny fiantraikan'ny homogenizer fitaratra dia mahantra, fa amin'ny ankapobeny, ny fomba homogenizer dia tsy afaka manakana ny fisehoan-javatra manimba.Noho izany, raha simba ny fitrandrahana, ny homogenizer elektrika tany am-boalohany dia tokony hampiasaina amin'ny fitotoana amin'ny azota azota;ny homogenizer vera tany am-boalohany dia tokony hovana amin'ny homogenizer elektrika na mivantana amin'ny azota azota.Ny olana dia efa ho 100% azo atao.mahazo vahaolana.
Ny olan'ny sisa tavela amin'ny fahalotoana miantraika amin'ny andrana manaraka dia manana antony maro samihafa noho ny fahapotehana, ary samy hafa ny vahaolana.Raha fintinina,raha toa ka misy fahasimbana na fahalotoana tavela ao amin'ny tavy, ny fomba fitrandrahana/réagent ho an'ny akora andrana manokana dia tsy maintsy atao tsara.Tsy mila mampiasa santionany sarobidy ianao amin'ny fanatsarana: azonao atao ny mividy biby kely toy ny trondro/akoho eny an-tsena, alao ny ampahany mifanaraka amin'ny akora ho an'ny fitrandrahana RNA, ary ny ampahany hafa amin'ny fitrandrahana proteinina - mitoto amin'ny vava, ny vavony ary ny tsinainy.
Ny RNA kendrena amin'ny RNA nalaina dia ampiasaina amin'ny fanandramana fanaraha-maso samihafa, ary tsy mitovy ny fepetra takian'ny kalitaony
Ny fananganana tranomboky cDNA dia mitaky ny fahamarinan'ny ARN tsy misy sisa tavela amin'ny inhibitors fanehoan-kevitra anzima;Ny avaratra dia mitaky ny fahamendrehan'ny ARN ambony kokoa sy ny fepetra ambany kokoa ho an'ny sisa tavela amin'ny fihenjanan'ny enzyme;Ny RT-PCR dia tsy mitaky ny fahamendrehan'ny RNA avo loatra,fa manakana ny fihetsiky ny anzima.Hentitra ny fitakiana ny sisa.Ny fidirana dia mamaritra ny vokatra;isaky ny hahazoana ny ARN madio indrindra no tanjona dia handany ny olona sy ny vola izany.
Fanangonana/Fitehirizana santionany
Ny anton-javatra misy fiantraikany amin'ny fahapotehana Rehefa avy nandao ny vatana velona/na ny tontolon'ny fitomboana tany am-boalohany ny santionany, dia hanomboka hanimba ny ARN ny anzima endogenous ao amin'ilay santionany,ary ny tahan'ny fahasimbana dia mifandray amin'ny votoatin'ny anzima endogenous sy ny mari-pana.Amin'ny fomba mahazatra, tsy misy afa-tsy fomba roa hanakanana tanteraka ny asan'ny anzima endogenous: ampio lysate avy hatrany ary homogenize tsara sy haingana;tapaho kely ary avy hatrany dia mangatsiaka amin'ny azota azota.Ireo fomba roa ireo dia mitaky fandidiana haingana.Ity farany dia mety amin'ny santionany rehetra, fa ny voalohany dia mety amin'ny sela misy sela ambany sy ny anzima endogenous ary mora kokoa ny homogenize.Amin'ny ankapobeny, ny tavy amin'ny zavamaniry, ny atiny, ny timus, ny pancreas, ny spleen, ny ati-doha, ny tavy, ny hozatra, sns, dia tsara indrindra ho mangatsiaka amin'ny azota rano alohan'ny handehanana.
Fizarana sy homogenization ny santionany
Antony misy fiantraikany amin'ny fahapotehana sy ny vokatra Ny fizarazarana santionany diaho an'ny homogenization tanteraka, izay natao ho an'ny famoahana feno sy feno ny RNA.Ny sela dia azo atao homogenized mivantana nefa tsy tapaka.Ny tavy dia azo atao homogene raha tsy rehefa tapaka.Ny masirasira sy ny bakteria dia mila vakiana miaraka amin'ny enzymes mifanaraka amin'izany alohan'ny hahatonga azy ho homogenized.Ny tissue miaraka amin'ny votoatin'ny enzyme endogenous ambany kokoa sy ny homogenization mora kokoa dia mety ho potipotika sy homogenized amin'ny fotoana iray ao amin'ny lysate amin'ny homogenizer;sela zavamaniry, aty, thymus, sarakaty, spleen, ati-doha, tavy, hozatra sela sy ny santionany, na avo amin'ny endogenous anzima na tsy mora homogenized,noho izany dia tsy maintsy atao misaraka ny fikorontanan'ny tasy sy ny homogenization.Ny fomba azo antoka indrindra sy mamokatra indrindra amin'ny fanaparitahana dia ny fikosoham-bary amin'ny azota azota, ary ny fomba azo antoka indrindra amin'ny homogenization dia ny fampiasana homogenizer elektrika.Fanamarihana manokana momba ny fikosoham-bary miaraka amin'ny azota ranon-javatra: ny santionany dia tsy tokony ho levona mandritra ny dingan'ny fitotoana manontolo, satria mety hiasa kokoa ny anzima endogenous rehefa mangatsiaka.
Safidin'ny lysate
Misy fiantraikany amin'ny fanamorana ny asa sy ny anton'ny fahalotoana endogen sisa tavela Ny vahaolana lysis fampiasa matetika dia saika manakana ny asan'ny RNase.Noho izany, ny teboka manan-danja amin'ny fisafidianana vahaolana lysis dia ny fandinihana miaraka amin'ny fomba fanadiovana.Misy maningana iray:santionany amin'ny avo endogenous anzima afa-po dia soso-kevitra ny mampiasa lysate misy phenol mba hampitombo ny fahafahana inactivate endogenous anzima.
Safidy ny fomba fanadiovana
Ny anton-javatra misy fiantraikany amin'ny loto endogen sisa tavela, ny hafainganam-pandehan'ny fitrandrahana Ho an'ny santionany madio toy ny sela, dia azo atao ny vokatra mahafa-po amin'ny fomba fanadiovana rehetra eo am-pelatanana.Fa ho an'ny santionany maro hafa, indrindra fa ireo manana fahalotoana avo lenta toy ny zavamaniry, atiny, bakteria, sns, dia zava-dehibe ny fisafidianana fomba fanadiovana mety.Ny fomba fanadiovana centrifugal tsanganana dia manana hafainganam-pandehan'ny fitrandrahana haingana ary afaka manala ny loto izay misy fiantraikany amin'ny fanehoan-kevitry ny RNA manaraka, saingy lafo izany (Foregene dia afaka manolotra kitapo lafo vidy, tsindrio ny antsipiriany bebe kokoa.Eto);Ny fampiasana fomba fanadiovana ara-toekarena sy mahazatra, toy ny rotsak'orana LiCl, dia afaka mahazo vokatra mahafa-po ihany koa, fa ny fotoana fiasana dia lava..
"Disciplines telo sy fifantohana valo" ho an'ny fitrandrahana RNA
Discipline 1:Atsaharo ny fandotoana ny enzyme exogenous.
Fanamarihana 1:Manaova saron-tava sy fonon-tanana hentitra.
Fanamarihana 2:Ny fantsona centrifuge, ny lohan-doha, ny tsorakazo pipette, ny tanky electrophoresis, ary ny dabilio andrana tafiditra ao anatin'ny fanandramana dia tokony hariana tsara.
Fanamarihana 3:Ny reagents/vahaolana tafiditra amin'ny andrana, indrindra ny rano, dia tsy maintsy tsy misy RNase.
Discipline 2:Manakana ny asan'ny anzima endogenous
Fanamarihana 4:Mifidiana fomba homogenization mety.
Fanamarihana 5:Mifidiana lysate mety.
Fanamarihana 6:Mifehy ny habetsahan'ny santionany manomboka.
Discipline 3:Hazavao ny tanjonao fitrandrahana
Fanamarihana 7:Miaraka amin'ny rafitra lysate izay manakaiky ny santionany voalohany indrindra, dia mihena be ny tahan'ny fahombiazana amin'ny fitrandrahana.
Fanamarihana 8:Ny hany fepetra ara-toekarena ho an'ny fitrandrahana RNA mahomby dia ny fahombiazana amin'ny fanandramana manaraka, fa tsy ny vokatra.
Loharano 10 ambony amin'ny fandotoana RNase
1. Ny rantsantanana no loharano voalohany amin'ny enzyme exogenous, ka tsy maintsy anaovana fonon-tanana sy soloina matetika.Ankoatr'izay dia tsy maintsy manao saron-tava ihany koa, satria loharanon-danjan'ny enzymes koa ny fofonaina.Ny tombony fanampiny amin'ny fanaovana saron-tava fonon-tanana dia ny fiarovana ny mpanandrana.
2. Torohevitra pipette, fantsona centrifuge, pipettes - Ny RNase dia tsy azo esorina amin'ny sterilization irery, noho izany dia tokony hokarakaraina amin'ny DEPC ny toro-hevitra pipette sy ny fantsona centrifuge, na dia voamarika ho DEPC aza izy ireo.Ny tsara indrindra dia ny mampiasa pipette misy tanjona manokana, mamafa azy amin'ny baolina landihazo misy alikaola 75% alohan'ny hampiasana azy, indrindra fa ny tsorakazo;fanampin'izay, tandremo tsara ny tsy mampiasa fanalana loha.
3. Ny rano/buffer dia tsy maintsy tsy misy loto RNase.
4. Farafahakeliny ny latabatra fitsapana dia tokony hofafana madio amin'ny baolina landihazo 75%.
5.Endogenous RNase Ny sela rehetra dia misy anzima endogenous, noho izany ny fampangatsiahana haingana ny tavy misy azota azota no fomba tsara indrindra hampihenana ny fahasimbana.Ny fomba fitehirizana / fikosoham-bary azota dia tsy mety, saingy io no hany fomba ho an'ny tavy misy enzymes endogenous avo lenta.
6. Santionan'ny RNA Ny vokatra fitrandrahana RNA dia mety ahitana soritra fandotoana RNase.
7. Ny fitrandrahana Plasmid Ny fitrandrahana plasmid dia matetika mampiasa Rnase mba hanimba ny ARN, ary ny Rnase sisa dia tokony ho levonina miaraka amin'ny Proteinase K ary alaina amin'ny PCI.
8. Fitehirizana RNA Na dia tehirizina amin'ny hafanana ambany aza izy, dia mety hiteraka fahasimban'ny ARN ny habetsahan'ny RNase.Ny vahaolana tsara indrindra amin'ny fitehirizana maharitra ny ARN dia ny fampiatoana sira/alcool, satria ny alikaola dia manakana ny hetsika enzymatic rehetra amin'ny hafanana ambany.
9. Rehefa misy ireo ions ireo ny cation (Ca, Mg), ny hafanana amin'ny 80C mandritra ny 5 minitra dia hahatonga ny ARN ho tapaka, ka raha mila hafanana ny RNA, dia mila misy agent chelating (1mM Sodium Citrate, pH 6.4) ny vahaolana fiarovana.
10. Ny Enzyme ampiasaina amin'ny andrana manaraka dia mety ho voaloton'ny RNase.
Torohevitra 10 momba ny fitrandrahana RNA
1: Misoroka haingana ny hetsika RNase.Ny santionany dia mivaingana haingana aorian'ny fanangonana, ary ny RNase dia tsy miasa amin'ny asa haingana mandritra ny lysis.
2: Mifidiana fomba fitrandrahana mety ho an'ny tavy misy ribozyme avo lenta, ary ny tavy adipose dia tsara indrindra raha mampiasa ny fomba misy phenol.
3: Ny kalitaon'ny faminaniana dia mitaky ny Avaratra, ny fananganana tranomboky cDNA dia mitaky fahamendrehana avo, ary ny RT-PCR sy RPA (Ribonuclease protection assay) dia tsy mitaky fahamendrehana avo.Ny RT-PCR dia mitaky fahadiovana avo (ampahany inhibitor enzyme).
4: Ny homogenization tanteraka no fanalahidin'ny fanatsarana ny vokatra sy ny fampihenana ny fahasimbana.
5: Jereo ny fahamarinan'ny RNA electrophoresis detection, 28S: 18S = 2: 1 dia famantarana feno, 1: 1 dia azo ekena ihany koa amin'ny ankamaroan'ny fanandramana.
6: Fanesorana ny ADN ho an'ny RT-PCR, famakafakana laharana Tsara kokoa ny mampiasa Dnase I hanesorana ny ADN.
7: Mampihena ny fandotoana ny enzyme exogenous - tsy azo ampidirina avy any ivelany ny enzymes.
8: Rehefa mifantoka amin'ny asidra nokleika ambany dia tokony ampiana reagent miaraka amin'ny rotsak'orana.Fa mba hisorohana ny co-precipitant misy anzima sy ny ADN fandotoana.
9: levona tsara ny ARN, raha ilaina, hafanaina amin'ny 65C mandritra ny 5 minitra.
fomba fitahirizana mety
Azo tehirizina amin'ny -20C mandritra ny fotoana fohy, ary amin'ny -80C mandritra ny fotoana maharitra.Ny dingana voalohany amin'ny fanatsarana ny vokatra RNA dia ny fahatsapana fa miovaova be ny votoatin'ny ARN amin'ny santionany samihafa.Be dia be (2-4ug/mg) toy ny aty, pancreas, fo, antonony be (0.05-2ug/mg) toy ny atidoha, embryon, voa, havokavoka, thymus, ovaire, ambany be (<0.05ug/mg) mg) toy ny tatavia, taolana, tavy.
1: Lyse sela hamoaka RN - raha tsy mivoaka ny RNA dia hihena ny vokatra.Ny homogenization elektrika dia miasa tsara kokoa noho ny fomba homogenization hafa, saingy mety mila ampiarahina amin'ny fomba hafa koa, toy ny fanosehana azota azota, fandevonan-kanina enzymatic (Lysozyme/Lyticase)
2: Optimization ny fomba fitrandrahana.Ny olana lehibe indrindra amin'ny fomba mifototra amin'ny phenol dia ny stratification tsy feno sy ny fahaverezan'ny RNA ampahany (tsy azo esorina tanteraka ny supernatant).Ny stratification tsy feno dia noho ny asidra nokleika sy proteinina avo lenta, izay azo vahana amin'ny fampitomboana ny habetsaky ny lysate ampiasaina na ny fampihenana ny habetsaky ny santionany.Nasiana dingan'ny fitrandrahana chloroform ny tavy adipose.Ny fatiantoka RNA dia azo ahena amin'ny alàlan'ny paompy miverina na amin'ny fanesorana ny sosona organika arahin'ny centrifugation.Ny olana lehibe indrindra amin'ny fomba mifototra amin'ny centrifugation dia ny santionany tafahoatra.
Torohevitra momba ny fitrandrahana klasika
1. Fanadiovana phenol: Ampio phenol/Chloroform 1:1 mitovy ny habeny ary afangaro mafy mandritra ny 1-2 minitra.Centrifuge amin'ny hafainganam-pandeha ambony mandritra ny 2 minitra.Esory tsara ny supernatant (80-90%).Aza tonga any amin'ny sosona afovoany mihitsy.Azo ampiana amin'ny Phenol/Chloroform ny habetsahan'ny vahaolana fanehoan-kevitra ary esorina ny supernatant.Ireo supernatant roa dia azo afangaro miaraka amin'ny rotsak'orana asidra nokleika mba hanatsarana ny vokatra.Aza milefitra loatra rehefa mampifangaro, ary aza manandrana manala ny supernatant rehetra.
2. Fanasana amin'ny ethanol 70-80%: Mandritra ny fanasana dia tsy maintsy mihantona ny asidra nokleika mba hahazoana antoka fa hosasana ny sira sisa tavela.Amin'izay fotoana izay, avy hatrany rehefa avy nandraraka ny ethanol, centrifuge amin'ny hafainganam-pandeha avo nandritra ny segondra vitsivitsy, ary avy eo dia esory ny sisa tavela amin'ny pipette.Atsaharo rehefa avy nijoro tamin'ny mari-pana mandritra ny 5-10 minitra.
11. Fitrandrahana fikambanana manokana
1. Fibrous tissue: Ny fanalahidin'ny fitrandrahana RNA avy amin'ny tavy fibrous toy ny hozatry ny fo/skeletal dia ny manakorontana tanteraka ny tavy.Ireo sela ireo dia manana hakitroky ny sela ambany, noho izany dia ambany ny habetsahan'ny ARN isaky ny lanjan'ny sela, ary tsara kokoa ny mampiasa vola manomboka araka izay azo atao.Tandremo tsara ny fitotoana ny tavy ao anatin'ny andro mangatsiaka.
2. Tavy be proteinina/matavy: be ny tavy ao amin'ny ati-doha/legioma.Aorian'ny fitrandrahana PCI dia misy floccules fotsy ny supernatant.Ny supernatant dia tsy maintsy esorina indray amin'ny chloroform.
3. Tissues misy asidra nucleic/ribozyme avo lenta: ny spleen/thymus dia manana asidra nokleika sy ribozyme avo lenta.Ny fikosoham-bary ao anatin'ny toe-javatra mangatsiaka arahin'ny homogenization haingana dia afaka manafoana ny ribozymes.Na izany aza, raha manjavozavo loatra ny lysate (noho ny votoatin'ny asidra nokleika avo lenta), dia tsy ho afaka stratify tsara ny fitrandrahana PCI;Ny fampidirana lysate bebe kokoa dia afaka mamaha ity olana ity.Ny fitrandrahana PCI marobe dia afaka manala ny ADN sisa tavela.Raha misy entona fotsy miforona avy hatrany aorian'ny fampidirana alikaola, dia manondro fandotoana ADN izany.Ny fitrandrahana indray miaraka amin'ny PCI asidra aorian'ny famongorana dia afaka manala ny fandotoana ADN.
4. Ny vatan'ny zavamaniry: Ny vatan'ny zavamaniry dia sarotra kokoa noho ny vatan'ny biby.Amin'ny ankapobeny, ny zava-maniry dia nototoina ao anatin'ny toe-javatra azota ranon-javatra, noho izany dia tsy mahazatra ny fahasimban'ny ARN amin'ny alàlan'ny anzima endogenous.Raha tsy voavaha ny olan'ny fahapotehana, dia azo antoka fa vokatry ny loto ao anatin'ilay santionany izany.Ny loto ao anatin'ny zava-maniry maro dia hitarika ho amin'ny sisa, ary ny antony mahatonga ny sisa dia matetika satria ireo loto ireo dia misy itovizana amin'ny RNA: ianao dia mitsambikina ary izaho dia mitsambikina, ary ianao dia mi-adsorb ary izaho.Ireo toetra ireo dia mamaritra fa tena mahery vaika ny enzyme inhibitors.
Amin'izao fotoana izao, ny reagents fitrandrahana RNA ara-barotra dia azo ampifanarahana amin'ny vatan'ny biby rehetra miaraka amin'ny fanitsiana kely, saingy vitsy ny reagents fitrandrahana RNA ara-barotra izay mety ho an'ny ankamaroan'ny vatan'ny zavamaniry.Soa ihany fa afaka manome manokana ny Foregenefitaovana fitrandrahana RNA, manana isikaFitaovana fitokana-monina RNA Total, Plant Total RNA Isolation Kit Plus.Ity farany dia natao manokana ho an'ny zavamaniry misy polysaccharide sy polyphenol avo lenta.Ho an'ny fitrandrahana RNA dia tsara indrindra ny fanehoan-kevitra avy amin'ireo mpampiasa laboratoara.
12. Ny fiantraikan'ny santionany mangatsiaka sy mandevona Mety ho lehibe kokoa ny santionany mangatsiaka, ary mila tapahina alohan'ny hampiasana azy amin'ny fitrandrahana RNA.Ny santionany dia miempo (mety ho ampahany) mandritra ny fanapahana.Mety mila lanjaina ny santionany mangatsiaka alohan'ny fitrandrahana RNA, ary azo antoka fa hitranga mandritra ity dingana ity.Indraindray, ny fanalefahana ny santionany koa dia mitranga mandritra ny fizotran'ny fikosoham-bary azota;na ny santionany mangatsiaka dia ampiana mivantana amin'ny lysate tsy misy fikosoham-bary azota, ary azo antoka fa hitranga alohan'ny homogenization tanteraka.Ny fanandramana dia naneho fa ny tavy mangatsiaka dia mora kokoa amin'ny fahapotehan'ny ARN mandritra ny fandevenana noho ny tavy vaovao.Ny mety ho antony: Manimba ny rafitra ao anatin'ny sela ny fizotry ny fandoroana, ka manamora ny fifandraisana mivantana amin'ny RNA ny anzima endogenous.
13. Fitsarana ny kalitaon'ny ARN Matetika ny electrophoresis dia ampiasaina hitsarana ny fahamarinan'ny ARN, ary ny A260/A280 dia ampiasaina hitsarana ny fahadiovan'ny ARN.Amin'ny teoria, ny ARN tsy misy dikany dia manana tahan'ny 28S: 18S = 2.7: 1, ary ny ankamaroan'ny angona dia manantitrantitra ny tahan'ny 28S: 18S = 2: 1.Ny zava-misy dia saika tsy misy ARN nalaina avy amin'ny santionany afa-tsy sela ao amin'ny ratio 2: 1 (izany dia azo tamin'ny fampiasana ny Agilent Bioanalyzer).
Ny vokatry ny electrophoresis an'ny RNA dia misy fiantraikany amin'ny lafin-javatra maro, ao anatin'izany ny rafitra faharoa, ny toetry ny electrophoresis, ny santionany enta-mavesatra, ny haavon'ny saturation amin'ny EB, sns.Raha mazava tsara ny 28S amin'ny 2kb sy ny 18S amin'ny 0.9kb, ary ny 28S: 18S> 1, dia afaka mahafeno ny fepetra takian'ny ankamaroan'ny fanandramana manaraka ny fahamendrehana.
A260/A280 dia famantarana izay niteraka fisafotofotoana be.Voalohany indrindra, ilaina ny manazava ny dikan'io famantarana io ho an'ny asidra nukleika: ARN madio, ny A260/280 = 2.0 eo ho eo.RNA madio no 'antony' ary A260/A280 = 2 no 'vokany'.Ankehitriny dia mampiasa A260/A280 ho 'antony' ny rehetra, mieritreritra fa "raha A260/A280 = 2, dia madio ny RNA", izay mitarika ho amin'ny fisafotofotoana.
Raha liana ianao, dia azonao ampiana reagent kely izay matetika ampiasaina amin'ny fitrandrahana, toy ny phenol, guanidine isothiocyanate, PEG, sns., ny santionan'ny ARN anao, ary avy eo mandrefy ny ratio A260/A280.Ny zava-misy dia maro amin'ireo reagents ampiasaina amin'ny fitrandrahana RNA, ary koa ny loto maro ao amin'ny santionany, mifoka manodidina ny A260 sy A280, izay misy fiantraikany amin'ny A260/A280.
Ny fomba fiasa manan-danja indrindra amin'izao fotoana izao dia ny mijery ny santionan'ny ARN amin'ny 200-300 nm.Ny curve an'ny ARN madio dia manana ireto toetra manaraka ireto: ny fiolahana dia malama, ny A230 sy ny A260 dia teboka fihodinana roa, ny A300 dia manakaiky ny 0, ny A260/A280 = manodidina ny 2.0, ary ny A260/A230 = manodidina ny 2.0.Raha tsy misy ny angon-drakitra scan, dia tsy maintsy voafaritra ihany koa ny tahan'ny A260/A230, satria io tahan'ny io dia saro-pady kokoa amin'ny fifindran'ny loto rehetra misy fiantraikany amin'ny fihetsiky ny enzymatic.Eritrereto ny elanelan'ny fitaovana (0.1–0.5 ho an'ny A260).
Misy trangan-javatra mahasoa roa hafa: ny tahan'ny dia ho 0,3 eo ho eo rehefa refesina anaty rano ny A260/A280;raha ny tahan'ny refesina amin'ny 10 mM EDTA dia eo amin'ny 0.2 ambony noho ny refesina amin'ny 1 mM EDTA.
Vokatra mifandraika:
China Plant Total RNA Isolation Kit Manufacturer and Supplier |Foregene (foreivd.com)
Andiam-pitokana-monina RNA - Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)
Fotoana fandefasana: Jul-15-2022
