1

Momba ny fitrandrahana RNA

Telopolo taona lasa izay, ho an'ny fitrandrahana RNA, ny azonay eritreretina dia ny fomba hahazoana RNA feno, na izany aza, tsy nisy fepetra takiana amin'ny hafainganam-pandehan'ny fitrandrahana (The first-generation Techology the Trizol method born).Miaraka amin'ny fanavaozana miverimberina amin'ny teknolojia fitrandrahana RNA, ny azontsika atao dia tsy voafetra amin'ny fahazoana valiny.Rehefa niatrika ny fitrandrahana ireo reagents mifototra amin'ny Trizol taranaka voalohany, dia sahiran-tsaina amin'ny ankapobeny ny mpandinika ny dingana fampandehanana azy;na dia taorian'ny fanatsarana sy fanavaozana maro aza dia mbola nila fotoana be izany.Mandritra izany fotoana izany, ny reagents organika toy ny phenol sy chloroform dia mila ampiasaina amin'ny dingan'ny fitrandrahana, izay manohintohina ny fiarovana ny mpiasa mifandraika amin'ny lafiny iray.

2Mahomby, mety ary azo antoka

Ny fitadiavana vokatra fitrandrahana RNA mahomby, mety ary azo antoka dia lasa tanjona voalohany amin'ny mpanandrana.Noho izany dia nisy ny fomba adsorption Silica Spin Column ho an'ny fitrandrahana RNA.Ny vokatra fitrandrahana RNA andiany fahatelo an'ny Foregene dia misarika ny tombony amin'ny vokatra fitrandrahana tsanganana teo aloha, amin'ny fampiasana (DNA-Cleaning + RNA ihany) teknolojia Spin Column roa hanesorana ny gDNA sy ny potipoti-javatra amin'ny fotoana iray, tsy misy fitsaboana DNase ny sisa gDNA, ary tsy mampiasa phenol intsony, sns. Reagents misy poizina sy manimba, mba hahazoana fotoana fohy, vokatra avo, fahadiovana tsara, ary mety hampidi-doza ny ARN.

tabilao fampitahana fizotry ny asa

3

tabilao fampitahana vokatra andrana

Ny kitapo fitokana-monina foregene totalin'ny RNA dia manana vokatra fitrandrahana RNA avo lenta, fahadiovana tsara, ary ny vokatry ny fitrandrahana miRNA dia tsara kokoa noho ny kitapo marika hafa.

4

Electrophoresis amin'ny 50 mg ny atiny totozy totalin'ny ARN nalaina tamin'ny fomba samihafa
Ny taranaka voalohany (1: Trizol)
Taranaka faharoa (2: kitapo fitrandrahana RNA avy amin'ny orinasa A)
Ny taranaka fahatelo (3: kitapo fitrandrahana RNA miampy avy amin'ny orinasa A, 4: Foregene: RNA Isolation kits)

Grapika qPCR

Ny ADN génomika dia tsy maintsy esorina amin'ny fomba mahomby mandritra ny fitrandrahana RNA, raha tsy izany dia hisy fiantraikany tsy voafehy amin'ny andrana any amin'ny renirano (voalohany sanda CT, labozia diso).Ny kitapo foregene manaraka dia afaka manala tsara ny ADN genomika tsy misy fanampiana DNase, mitahiry fotoana betsaka, ary misoroka ny fahasimbana vokatry ny fandotoana RNase exogenous.
Ny taranaka voalohany (maitso manondro TRlzol-, mena manondro TRlzol+)

5Taranaka faharoa (Ny manga dia manondro ny orinasa A RNA fitaovana fitrandrahana -, mena dia manondro ny orinasa A RNA fitaovana fitrandrahana +)

6

Ny taranaka fahatelo (manga manondro ny orinasa A RNA extraction kit plus, maitso manondro Foregene RNA Isolation kits)

7

(Fanamarihana: "_" ao amin'ny grafika qPCR dia manondro fa tsy nampiana DNase, ary tsy nesorina ny fandotoana ny ADN; "+" dia manondro fa nampiana DNase, ary nesorina ny fandotoana ny ADN)

Ny fitrandrahana RNA feno ao anatin'ny 11min

Tsy ilaina ny fanangonan-karena amin'ny asidra nokleika nandritra ny taona maro, ny vokatra andian-tsarimihetsika RNA mitoka-monina Foregene avo lenta dia afaka mamela anao hahazo RNA avo lenta sy madio ao anatin'ny 11 minitra mba hihaona amin'ny filana fanandramana midina.

9Hatramin'izao, Foregene total RNA isolaton kits series dia fantatry ny mpanjifa marobe ary nandray anjara tamin'ny literatiora be dia be.Ny tena fampiasan'ny mpanjifa ny tabilao electrophoresis fanehoan-kevitra sy ny curve amplification PCR quantitative taorian'ny transcription mivadika dia mampiseho fa ny ARN nalaina tamin'ny fampiasana ny vokatra Foregene dia tsy avo afa-tsy amin'ny fifantohana, fa koa amin'ny fahamendrehana tsara.Ny teknolojian'ny vokatra efa nozahan'ny tsena ihany no azon'ny rehetra ankasitrahana.

1011

Kitapo fitokana-monina RNA Total Cell

Ny vokatra RNA avo

Haingana: Vitao ao anatin'ny 11 minitra ny fitokana-monina RNA

Fiarovana: Tsy misy simika organika nampiana

Citation misy isa ambony:

1. Yuan Fang, Zezhong Liu, Yang Qiu, et al.Ny fanakanana ny viriosy suppressor ny proteinina RNAi amin'ny peptides mpamorona dia miaro amin'ny otrikaretina enteroviral ao amin'ny vivo, Immunity, 54 (10), 2021: 2231-2244.e6.(IF:31.745,Viral RNA Isolation Kit,Kat No.RE-02011)

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1074761321003617

2. Ren, Y., Wang, A., Wu, D. et al.Ny fampiatoana indroa ny tsy fahampiana voajanahary sy ny apoptose amin'ny proteinina cytomegalovirus olombelona UL37x1 dia mamela ny famerenana ny viriosy mahomby.Nat Microbiol 7, 1041–1053 (2022).(IF:30.964,Kitapo fitokana-monina RNA Total Cell,Kat No.RE-03111)

https://doi.org/10.1038/s41564-022-01136-6


Fotoana fandefasana: Jul-27-2022