• facebook
  • Linkedin
  • YOUTUBE

Torohevitra hanatsarana ny fanarenana ny lakaoly

1. Ampitomboy ny santionany entana mandritra ny electrophoresis.

2. Mampiasà buffer electrophoresis vao voaomana.

3. Rehefa manapaka lakaoly, miezaka ny manapaka afa-tsy ny lakaoly amin'ny strip mba hampihenana ny habetsaky ny lakaoly fanapahana: tsy mila lakaoly amin'ny tanjona vitsivitsy sombintsombiny, raha tsy izany dia hisy fiantraikany amin'ny fahasitranana.

4. Rehefa avy nandrendrika lakaoly roa na maromaro, dia ampiasao fantsona iray na manao ahoana na manao ahoana ny haben'ny boky ary afindrao amin'ny tsanganana iray ihany.

5. Ny vahaolana ampiana ao amin'ny sol dia mety ho kely kokoa, izay mety kokoa amin'ny fatoran'ny ADN amin'ny membrane, fa amin'ny ankapobeny dia tsy mihoatra ny 750ul.

6. Ny fanalahidin'ny famerenana amin'ny gel dia ny mamatotra ny ADN amin'ny tsanganana amin'ny alàlan'ny fifantohana sira, ny asidra (fiara) ary ny hydrophobicity ny vahaolana ao amin'ny tsanganana.Noho izany, raha avo loatra ny pH an'ny buffer electrophoresis, dia azo ampiana 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) ny sol;mba hanakanana tsara kokoa ny molekiolan'ny ADN amin'ny membrane, dia azo ampiana 30% isopropanol ny hafanana ao anaty ranon-javatra aorian'ny famongorana ny lakaoly.

7. Alohan'ny hampidirana ny eluent, avelao ny tsanganana amin'ny mari-pana mandritra ny minitra vitsivitsy (tokony ho 10 minitra) mba hialana tanteraka ny ethanol.

8. Farany, ampio kely ny eluent mba hampihenana ny habetsaky ny fanarenana.Amin'ny ankapobeny, 30-50μl eluent dia ampiasaina amin'ny elution (tsy dia kely loatra, raha tsy izany dia tsy ho afaka mandona ny membrane, izay tsy mety amin'ny elution);ny vongan-dranomandry dia eo afovoan'ny membrane, mba hanalana tanteraka ny ADN mifamatotra amin'ny membrane.

9. Rehefa avy nanampy ny eluent, dia azo eluted amin`ny rano fandroana ny 55 degre nandritra ny 5 minitra na napetraka tao amin`ny rano fandroana ny 50 degre mihoatra ny 10 minitra, na voaisy tombo-kase amin`ny parafilm amin`ny 4 degre ny alina, ary avy eo centrifuged ho fanarenana ny ampitso, ny vokany dia tsara.

10. Ampidiro ao amin'ny tsanganana adsorption indray ny eluate voafantina ary avereno indray ny centrifuge.

sary8

Fomba sy fomba fiasa amin'ny famerenana ny vokatra PCR

1. Fanodinana fingotra mahazatra

Raha te hamerina ny lakaoly ianao, dia tsara kokoa ny mampiasa kitapo, izay mety ary manana taham-pahasitranana kely kokoa.Raha tena mila mamerina azy amin'ny tanana ianao dia azonao ampiana in-3 ny habetsahan'ny TE rehefa avy nanapaka ny lakaoly.Aorian'ny fandoroana ao anaty rano fandroana dia alaina madio ny phenol, phenol/chloroform, ary esorina ny ethanol.Dia izay.

2. Famerenana ny ADN avy amin'ny gels ambany

Fanadiovana ny sombintsombin'ny ADN Ampio TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) mitovy amin'ny habetsaky ny gel, ary apetraho ao anaty rano fandroana 65 ° C mandritra ny 5 minitra mba handrava tanteraka ny gel.

Taorian'ny nitondrana azy ho amin'ny mari-pana ao amin'ny efitrano, dia nasiana phenol mitovy amin'ny TE, TE ao amin'ny sosona ambony, ary nesorina ny sosona ambany amin'ny phenol, ary nafangaro moramora ny fangaro (tsy ilaina ny fangaro), ary atao centrifuge amin'ny 12.000 rpm mandritra ny 3 minitra.Avereno in-1-2.

Raiso ny supernatant, ampio boky 0,1 amin'ny 3mol / L sodium acetate (pH 5,2) ary in-2,5 heny amin'ny ethanol absolute mba hanatanterahana ny rotsak'orana ethanol.Esory ny ADN voadio miaraka amin'ny habetsahan'ny TE, refesina ny atiny, ary omano ny fampiasana azy (azo ampiasaina amin'ny fandalinana ny rafitry ny fototarazo kendrena, ny fanomanana probe, sns.).

3. PCR fanarenana amin'ny manokana amplification tsara

Raha tsara ny specificity ny PCR amplification, dia tsotra fanadiovana sy fanarenana ny PCR vokatra.Azonao atao ny manampy 50ug/ml proteinase K amin'ny vokatra PCR, 37 degre mandritra ny 1h, esory indray mandeha miaraka amin'ny phenol/chloroform, esory indray mandeha miaraka amin'ny chloroform, ary ampio 0,1 volume ny supernatant.Ny sodium acetate dia naverina tamin'ny alàlan'ny rotsak'orana miaraka amin'ny ethanol absolute 2.5.

Vokatra mifandraika:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/


Fotoana fandefasana: Sep-24-2022