Fampidirana:

ARN, anarana siantifika ribonucleic acid, ny fanafohezana azy dia avy amin'ny RiboNucleic Acid, dia karazana asidra nokleika miforona amin'ny fampifandraisana ribonucleotides am-polony farafahakeliny amin'ny alàlan'ny fatorana phosphodiester.

Ny fototry ny fikarohana ny RNA dia ny fanesorana ny totalin'ny RNA tsy misy loto, ary ny fitsipika fototra momba ny fitrandrahana RNA dia azo fintinina toy izao manaraka izao:

1. Manakorontana aloha ny sela

2. Esory avy eo ny loto macromolecular (proteinina, lipida, ADN, sns.)

3. Farany, ny ARN dia esorina rehefa manala sira sy solvents organika, ary manadio bebe kokoa ny ARN.

Fomba fitrandrahana taloha sy ankehitriny

Ny taranaka voalohany ny RNA fomba fitrandrahana dia ny TRIzol rotsak'orana fomba (reagents ampiasaina dia ahitana guanidine isothiocyanate, phenol, chloroform, sns) noforonin'ny raibe iray antsoina hoe Piotr Chomczynski sy ny renibe Nicoletta Sacchi, satria io famoronana mamela ny ARN fitrandrahana haingana sy mora, nanomboka tamin'izay dia nanomboka ny firongatry ny ARN.

Taty aoriana dia namidin'i Dadabe tamin'ny Invitrogen io patanty io, ary ny Invitrogen dia nampiroborobo an'io fomba io ho an'izao tontolo izao ary nanjary fomba fampiasa be dia be.

Taty aoriana dia nahazo ny Thermo ny Invitrogen!

Vokatra solontena: Invitrogen's TRIzol reagent

Na izany aza, ny fomba firotsahan'ny TRIzol dia mitaky rotsak'orana sy fitrandrahana RNA maro, ary misy poizina ny reagents ampiasaina ary maharitra ela ny fiasana.

Noho izany, ny fomba fanadiovana ny tsanganana-enzyme andiany faharoa dia tonga, amin'ny fampiasana silica gel membrane ho fitaovana adsorption asidra nokleika manokana mba hanamafisana ny famerenana ny ARN amin'ny santionany rehefa manala ny loto hafa.

Ny fomba fiasa faharoa dia manatsotra ny asa amin'ny alàlan'ny fampandehanana maharitra, mampihena ny risika, ary manatsara ny fahombiazan'ny fitrandrahana RNA.

Vokatra solontena: QIAGEN RNeasy sy ny ankamaroan'ny vokatra an-trano

Na izany aza, na ny fomba taranaka voalohany sy faharoa dia mitaky ny fampiasana DNase mba hanesorana ny fandotoana ADN, izay miteraka fahasahiranana amin'ny andrana midina manaraka.Ny DNase sisa dia hampihena ny fahombiazan'ny fandikana mivadika ary hampihena ny synthesis cDNA voalohany, ka hisy fiantraikany amin'ny fahamarinan'ny valiny.

Noho izany, ny fomba fitrandrahana taranaka fahatelo dia optimized amin'ny fototry ny taranaka faharoa.Ny fanandramana dia tsy mila manampy enzymes, ary ny ARN dia azo mora foana amin'ny tsanganana roa.

Tsanganana 1: Tsanganana fanadiovana ADN hanadio ny ADN

Tsanganana 2: Tsanganana RNA ihany no misoroka sy mamerina ny RNA

Ny fandidiana tsotra toy izany dia tsy vitan'ny hoe mamonjy fotoana, fa manamora ny fiasan'ny andrana any ambany!

Vokatra solontena: QIAGEN RNeasy Plus syForegeneRNA purification series vokatra

(RNeasy Plus)

(Foregene'sFitaovana fitokana-monina RNA Total）

Ilazao mangina!Ny kitapo RNA an'i Foregene koa dia manolotra RNase Eraser faran'izay mora ampiasaina, izay afaka manala tanteraka ny RNase 400μg eo amin'ny tany mivaingana ao anatin'ny 1 minitra, tsy manisy akora misy poizina amin'ny vatan'olombelona!

Pic1: tabilao fampitahana ny fizotran'ny asa

Ny vokatra Foregene dia afaka mamita ny fitrandrahana RNA amin'ny hira roa, aza mampialona ny hafa amin'ny fivoaran'ny andranao!

Pic2:Evokatra xperimental tabilao fampitahana

Ny taranaka voalohany (1: TRIzol)

Ny taranaka faharoa (2: RNeasy of QIAGEN)

Ny taranaka fahatelo (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Pic3: sarin'ny qPCR (sarin'ny curve amplification)

Ny taranaka voalohany (maitso midika hoe TRIzol -, mena midika hoe TRIzol +)

Ny taranaka faharoa (manga lanitra dia midika hoe QIAGEN RNeasy-, mena dia midika hoe QIAGEN RNeasy +)

Ny taranaka fahatelo (manga midika hoe QIAGEN RNeasy plus, maitso midika hoe Foregene)

(Fanamarihana: Ny tabilao qPCR “-” dia manondro fa tsy nampiana DNase ary tsy nesorina ny fandotoana ADN. Noho izany dia avo kokoa ny CT ary tsy marina ny valiny; "+" dia manondro fa nampiana DNase ary nesorina ny loto ADN, marina ny valiny)

Ny fanavaozana ara-teknika rehetra dia midika fa mivoatra amin'ny lalana tsotra sy mora kokoa ny fiasan'ny andrana.

Ny Foregene dia mikendry ny hanampy mpikaroka siantifika bebe kokoa hamonjy ny fotoana sy ny vidiny andrana, hahazo vokatra andrana avo lenta, ary hiara-hamorona zava-bita fikarohana siantifika sarobidy kokoa.