Mbola mampiasa Trizol ve ianao hanesorana ny ARN?
Gosh, aza avela hanahy ny fahasalamanao aho!
Trizol saika hatao an-jorom-bala, aza lazaina amiko fa mbola ao anaty haizina ianao?

Ny singa fototra amin'ny Trizol reagent dia phenol, ary ny reagents organika toy ny chloroform dia ampiana ihany koa amin'ny asa andrana.Ny fiparitahana maharitra dia hiteraka fahavoazana ho an'ny fahasalamanao, indrindra fa ny fikasihana mivantana amin'ny hoditra dia mety hiteraka may mahery vaika sy takaitra maharitra.

Amin'ny toe-javatra mahazatra, ny mpiara-miombon'antoka amin'ny laboratoara dia afaka mampihena ny loza amin'ny alàlan'ny fiadiana tanteraka (manao akanjo laboratoara, fonon-tanana ary saron-tava).

Ary ny torohevitro aminao dia: azafady manolo mivantana an'i Trizol mba hisorohana ny loza avy amin'ny loharano.

1. Ny vokatra voalohany amin'ny fitrandrahana RNA
Nivoaka tamin'ny 1987 (Trizol reagents)

tombony:
Extraction feno kokoa

Fatiantoka:
Ilaina ny reagents misy poizina toy ny guanidine isothiocyanate-phenol-chloroform;
Hetsika sarotra;
Mila mampiasa DNase hanesorana ny fandotoana ADN

2. Ny vokatra faharoa amin'ny fitrandrahana RNA
Nivoaka tamin'ny 1994 (QIAGEN RNeasy sy ny ankamaroan'ny vokatra an-trano)

tombony:
Ny fomba centrifugal tsanganana dia raisina, izay mora ampiasaina;

Fatiantoka:
Mila centrifuge mba hanesorana ny fako tavy
Mila mampiasa DNase hanesorana ny fandotoana ADN

3.Ny taranaka fahatelo vokatry ny fitrandrahana RNA
Nivoaka tamin'ny 2005 (QIAGEN RNeasy Plus sy Foregenevokatra andiany fanadiovana RNA)

tombony:
Ampiasao mivantana ny tsanganana fanesorana ADN mba hanesorana ny ADN sy ny korontana amin'ny fotoana mitovy, mitahiry fotoana sy ezaka;
Azo antoka sy mety, tsy mila ampiana tsanganana sivana sy DNase mba hanesorana mora foana ny loto sy hisorohana ny fandotoana ADN

Andeha hojerentsika ny fahasamihafana eo amin'ny fiasan'ny vokatra voalohany (Trizol), ny vokatra faharoa (RNeasy) ary ny vokatra avy amin'ny taranaka fahatelo (Foregene) amin'ny fitrandrahana RNA:

Ny fandidiana eo amin'ny tarehimarika dia mazava: ny vokatra taranaka fahatelo dia manana tombony mazava

Teny telo fotsiny hamariparitra: mora!Haingana!Fiarovana

Ny tabilaon'ny PK momba ny vokatra andranaHO AN'NYny taranaka voalohany, faharoa ary fahatelo vokatra avy amin'ny fitrandrahana RNA:

1. Electrophoretogram

Ny taranaka voalohany (1: Trizol)
Ny taranaka faharoa (2:QIAGEN RNeasy)
Ny taranaka fahatelo (3: QIAGEN RNeasy plus, 4: Foregene)

Inona no karazana vokatra tsara, ho fantatrao amin'ny fampitahana
RNA nalaina tamin'ny alalan'ny Foregene kit
Tsy ny fifantohana ambony ihany fa ny fahamendrehana tsara ihany koa

2.Grapika qPCR

Ny taranaka voalohany (Trizol)

Ny taranaka faharoa (sky blueMAMPIASAQIAGEN RNeasy-, menaMAMPIASAQIAGEN RNeasy +)

Ny taranaka fahatelo (manga midika hoe Foregene, maitso midika hoe QIAGEN RNeasy plus)

(Fanamarihana: Ny QIAGEN RNeasy andiany faharoa amin'ny grafika qPCR dia midika fa ny kitapo dia tsy manampy DNase ary tsy manala ny fandotoana ADN. Noho izany dia avo kokoa ny CT ary tsy marina ny valiny; Ny QIAGEN RNeasy + dia midika fa nampiana DNase ary nesorina ny loto ADN, ary marina ny valiny)

Na electrophoregrame izany na graphe curve amplification PCR quantitative dia tsy latsa-danja amin'ny vokatra avy any ivelany ny kalitaon'ny vokatra Foregene.