HAMPIDIRANA

RNA tsy misy kaody lava, lncRNA dia RNA tsy misy kaody manana halava mihoatra ny 200 nucleotides, amin'ny ankapobeny eo anelanelan'ny 200-100000 nt.Ny lncRNA dia mifehy ny fanehoana ny fototarazo amin'ny ambaratonga epigenetika, ny transcription ary ny post-transcriptional, ary mandray anjara amin'ny fampanginana ny krômôzôma X, ny fametahana genome sy ny fanovana chromatin, ny fampahavitrihana ny transcription, ny fitsabahana amin'ny transcription, ny fitaterana nokleary, ny fandrindrana ny tsingerin'ny sela, ny fifehezana ny fanavahana sela, ary ny fiantraikan'ny fanonerana fatra (Dosisy sy ny fisorohana ny aretina mifandray amin'ny fivoaran'ny olombelona). , ary iray amin'ireo toerana mafana amin'ny sehatry ny biomedicine amin'izao fotoana izao.

01  Karazana sy toetran'ny LncRNA

Ny lncRNA dia mizara ho karazany maro araka ny loharano samihafa namoronana azy, araka ny asehon'ny sary etsy ambony.Manana ireto toetra manaraka ireto:

1. Ny lncRNA dia matetika lava kokoa, miaraka amin'ny fomba fitenenana mavitrika sy fomba fisarahana samihafa mandritra ny fanavahana
2. Raha ampitahaina amin'ny fototarazon'ny coding, ny lncRNA dia matetika manana ambaratonga ambany kokoa
3. Ny ankabeazan'ny lncRNAs dia manana fitenenana mazava ara-potoana sy ara-potoana amin'ny dingan'ny fanavahana sy ny fivoaran'ny sela.
4. Misy fanehoana mampiavaka ny fivontosana sy ny aretina hafa
5. Ny toerana subcellular an'ny lncRNA dia samihafa
6. Ny filaharana dia ambany amin'ny fiarovana, fa ny fiasa dia manana ambaratonga fiarovana, sns.

02 Fanontaniana matetika momba ny LncRNA Reverse Transcription

Noho ny tsy fahampian'ny lncRNA ao amin'ny sela, ny halavany lava sy ny rafitra avo lenta, ny RNA toy izany dia matetika manana rafitra sarotra toy ny tadivavarana na volo, ary ny RT-qPCR dia mora voan'ny olana amin'ny fandikana mivadika tsy mahomby na ambany fahombiazana.

03 LncRNA reverse transcription solution

Ao amin'ny fitsipika afovoany, ny dingan'ny viriosy RNA mampiasa ny transcriptase mivadika azy mba hamoronana ADN amin'ny fampiasana RNA ho modely dia antsoina hoe transcription mivadika.Ny dingan'ny fampiasana RNA virus reverse transcriptase mba hamoronana cDNA template in vitro dia antsoina hoe reverse transcription.Ny singa fototra ao amin'ny rafitra transcription mivadika: RNA template, reverse transcriptase, primers ary singa hafa.

1. Môdely RNA

Ny fiantraikan'ny môdely RNA amin'ny fandikana mivadika dia hita taratra amin'ny rafitra, ny fahadiovany ary ny fahamendrehany.Ny avo kokoa ny fahadiovana sy ny fahamendrehan'ny ARN nalaina, no avo kokoa ny fahombiazan'ny transcription mivadika ary ny marina kokoa ny vokatra quantitative manaraka.Ny ARN nodiovina tamin'ny reagents fitrandrahana RNA fampiasa matetika dia misy sisa tavela amin'ny alikaola sy ny sira guanidine, izay misy fiantraikany mahery vaika amin'ny ankamaroan'ny transcriptase mivadika.

2. Reverse transcriptase

Ny transcriptase mivadika dia manana fiantraikany lehibe amin'ny rafitra transcription mivadika manontolo.Ny mari-pana mety ho an'ny transcriptase mivadika ampiasaina amin'ny ankamaroan'ny laboratoara dia amin'ny ankapobeny 42°C.Raha ny marina, ny fanokafana ny rafitra RNA avo lenta dia mitaky mari-pana ambony kokoa, ary ny fepetra takiana amin'ny transcriptase mivadika dia avo kokoa.

3.Primer

Ny primer transcription mivadika dia misy primer manokana momba ny fototarazo, primer kisendrasendra ary primer Oligo dT.Ny ankamaroan'ny lncRNA dia tsy misy rambony polyA, ary zava-dehibe ny mifanandrify tsara amin'ireo primer kisendrasendra miaraka amin'ny Oligo dT.

4. singa hafa

Raha jerena ny zava-misy fa ny RNA dia tena mora simba, dia azo ahena ny fampidirana ireo singa ao amin'ny rafitra transcription mivadika, izay afaka misoroka tsara ny fidirana amin'ny RNase ary miantoka ny fandrosoan'ny transcription mivadika.

Foregenedia mahazo avy amin'ny RNA môdely, mamadika transcription ho qPCR

Raiso an-tsakany sy an-davany ny fitadiavanao lncRNA

Animal Total RNA IsolationKit (miaraka amin'ny tsanganana manala gDNA)

Cell Total RNA IsolationKit (miaraka amin'ny tsanganana manala gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(miaraka amin'ny gDNase)(Super Premix ho an'ny synthesis cDNA tady voalohany avy amin'ny lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Advantages ofRNA fitrandrahana:

Ny kitapo dia mampiasa ny teknolojia fitrandrahana RNA taranaka fahatelo, tsy mila mampiasa DNase.

11 minitra avy amin'ny sela 96, 24, 12, ary 6-well plate kolontsaina, fitrandrahana avo lenta amin'ny RNA sela tsy misy gDNA, madio tsara, avo lenta.

Ny tombony amin'ny transcription mivadika lncRNA:

Rafitra fandikana mivadika novolavolaina manokana ho an'ny LncRNA hanesorana haingana ny fandotoana ADN.

Ny rafitra transcription mivadika dia manana fitoniana ara-panamafisana avo lenta ary mbola manana fahombiazan'ny fandikana mivadika tsara amin'ny 50 ° C.

Ny maodely misy votoaty GC avo lenta sy rafitra faharoa sarotra dia azo averina amin'ny fahombiazana avo.

tombonyof qPCR:

Ny fanombohana mafana Foregene Taq Polymerase dia manana fahombiazana amin'ny fanamafisam-peo avo kokoa, fahatsapan-tena amin'ny fanamafisam-peo avo kokoa, ary fanamafisana manokana kokoa.

Ny optimized Real PCR Easy Mix dia mahatonga ny SYBR Green manana fahatsapana avo lenta kokoa aho, ary ny hamafin'ny fluorescence dia in-3-5 heny noho ny vokatra mitovy, izay afaka mahafeno ny filan'ny karazana fluorescence quantitative andrana.