Ny COVID-19 dia areti-mifindra vokatry ny Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus Type 2. Rehefa voan'ny aretina ny olona iray, ny soritr'aretina mahazatra indrindra dia ny tazo, kohaka ary sempotra.

Ny santionany ampiasaina amin'ny fitiliana dia azo angonina amin'ny alàlan'ny swab nasopharyngeal na swab oropharyngeal.

Inona no atao hoe PCR?

Ny fomba mahazatra amin'ny fitiliana coronavirus dia fanehoan-kevitry ny rojo polymerase, PCR.Ity dia fomba iray ampiasaina betsaka amin'ny biolojia molekiola.Afaka mandika haingana an-tapitrisa ka hatramin'ny an'arivony tapitrisa ny sombin-javatra manokana ADN izy io.

Ny coronavirus vaovao dia misy fototarazo RNA misy tady tokana lava be.Mba hamantarana ireo viriosy ireo amin'ny alàlan'ny PCR, ny molekiola RNA dia tsy maintsy avadika ho filaharan'ny ADN mifameno amin'ny alàlan'ny transcriptase mivadika, ary avy eo dia azo ampitomboina amin'ny alàlan'ny fomba PCR mahazatra ny ADN vaovao, izay fantatra amin'ny anarana hoe RT-PCR.

Ny fizotran'ny RT-PCR

fitrandrahana RNA

Mba hanaovana an'io fomba io, ny RNA viraliny dia tokony horaisina amin'ny ankapobeny.Ny kitapo fanadiovana RNA isan-karazany dia azo ampiasaina amin'ny fisarahana mety, haingana ary mahomby.

Mba hanesorana ny RNA viraliny amin'ny fampiasana kitapo ara-barotra, ampio aloha ny santionany amin'ny fantsona microcentrifuge ary avy eo afangaro amin'ny buffer lysis.Ity buffer ity dia tena denaturation ary matetika misy phenol sy guanidine isothiocyanate.Ankoatr'izay, ny inhibitors RNase dia matetika hita ao amin'ny buffer lysis mba hiantohana ny fitokanana ny RNA viraliny.

Aorian'ny fampidirana ny buffer lysis, vortex amin'ny alàlan'ny pulse ny fantsona fampifangaroana ary atsipazo amin'ny mari-pana.Ny viriosy dia lysed ao anatin'ny fepetra denaturation be omen'ny buffer lysis.

Rehefa avy lysed ny santionany, ny centrifuge fantsona ampiasaina amin'ny fomba fanadiovana.Ny santionany dia ampidirina ao amin'ny fantsona centrifuge ary avy eo centrifuge.

Ity fomba fiasa ity dia fomba fitrandrahana amin'ny dingana mafy izay ahitana matrix gel silica ny dingan'ny mijanona.

Eo ambanin'ny fepetra sira sy pH tsara indrindra, ny molekiola RNA dia mifatotra amin'ny fonon'ny silica.

Mandritra izany fotoana izany, ny proteinina sy ny loto hafa dia nesorina.

Aorian'ny centrifugation, apetraho ao anaty fantsona fanangonana madio ny fantsona centrifuge, ario ny filtrate, ary ampio buffer fanasan-damba.

Apetraho ao anaty centrifuge indray ny fantsona mba hanerena ny buffer fanasan-damba amin'ny alàlan'ny membrane.Izany dia hanaisotra ny loto sisa tavela amin'ny membrane, ka ny ARN ihany no mifatotra amin'ny gel silica.

Rehefa voasasa ny santionany dia apetraho ao anaty fantsona microcentrifuge madio ny fantsona ary ampio ny buffer elution.

Avy eo dia atao centrifuge izy io mba hanerena ny buffer elution amin'ny alàlan'ny membrane.Ny buffer elution dia manala ny RNA virosy amin'ny tsanganana spin ary mahazo RNA voadio tsy misy proteinina, inhibitors ary loto hafa.

DINGANA 2

Concentrate mifangaro

Aorian'ny fanesorana ny RNA viraliny, ny dingana manaraka dia ny manomana ny fangaro fanehoan-kevitra amin'ny fanamafisana ny PCR.Amin'ity dingana ity dia ampiasaina ny concentrate.Ity vahaolana mivondrona ity dia vahaolana mivondrona efa voafangaro misy premix, reverse transcriptase, nucleotides, primer aloha, primer reverse, probe TaqMan ary polymerase ADN.

Farany, mba hamenoana io fangaro fanehoan-kevitra io, dia ampiana ny môdely RNA.Ny fantsona dia mifangaro amin'ny alàlan'ny vortexing pulse, ary avy eo ny fangaro fanehoan-kevitra dia entina ao anaty takelaka PCR.Matetika misy lavaka fantsakana 96 ny takelaka PCR ary afaka mamakafaka santionany maromaro miaraka.

DINGANA 3

PCR amplification

Avy eo, apetraho ao anaty milina PCR ny takelaka, izay mpitaingina mafana indrindra.

Ny RT-PCR amin'ny fotoana tena izy dia ampiasaina hamantarana ny coronavirus vaovao 2019 amin'ny alàlan'ny fanamafisana ny filaharana kendrena amin'ny fototarazo RdrRP, fototarazo E ary fototarazo N.Ny fisafidianana ny fototarazo kendrena dia miankina amin'ny filaharan'ny primer sy ny probe.

Ny dingana voalohany amin'ny RT-PCR dia ny fandikana mivadika.Ny tady voalohany amin'ny ADN mifameno dia novolavolaina, izay natomboka tamin'ny PCR reverse primer, izay mifatotra amin'ny ampahany mifameno amin'ny génome RNA viraliny.Avy eo ny transcriptase mivadika dia manampy ny nucleotides ADN amin'ny faran'ny 3′ amin'ny primer mba hamoronana ADN mifameno amin'ny ARN viral.Ny mari-pana sy ny faharetan'ity dingana ity dia miankina amin'ny primers, RNA kendrena, ary ny transcriptase mivadika ampiasaina.

Manaraka, dia ampiharina dingana denaturation voalohany, izay miteraka ny denaturation ny RNA-ADN hybride.Ilaina io dingana io mba hampavitrika ny polymerase ADN.Mandritra izany fotoana izany, ny reverse transcriptase dia tsy miasa.

Ny PCR dia ahitana andiana tsingerina mafana.Ny tsingerina tsirairay dia misy dingana denaturation, annealing ary fanitarana.

Ny dingana denaturation dia ny fanafanana ny efitrano fanehoan-kevitra amin'ny 95 degre Celsius ary ny fampiasana azy io ho denaturation ny maodely ADN misy tady roa.

Amin'ny dingana manaraka dia mihena ho 58 degre Celsius ny hafanan'ny fanehoan-kevitra, ahafahan'ny primer mandroso hiditra ao amin'ny ampahany mifameno amin'ny môdely ADN misy tady tokana.Ny mari-pana annealing mivantana dia miankina amin'ny halavany sy ny firafitry ny primer.

Ao amin'ny dingana fanitarana, ny polymerase ADN dia mamorona tady ADN vaovao izay mifameno amin'ny tady modely ADN.Amin'ny fampidirana ireo nokleary maimaim-poana mifameno amin'ny môdely amin'ny lalana 5′to 3′ avy amin'ny fangaro fanehoan-kevitra.Ny mari-pana amin'ity dingana ity dia miankina amin'ny ADN polymerase ampiasaina.

Aorian'ny tsingerina voalohany dia azo ny tanjona ADN misy tady roa.

Avy eo, midira ny tsingerina faharoa.Ny ADN misy tady roa dia denaturation mba hamokarana molekiola ADN roa tokana.

Amin'ny dingana manaraka dia ahena ny mari-pana amin'ny fanehoan-kevitra, apetraka amin'ny môdelin'ny ADN tsirairay ny primers, ary ny probe Taq-man dia atambatra amin'ny ampahany mifameno amin'ny ADN kendrena.

Ny probe TaqMan dia misy fluorophore mifamatotra amin'ny faran'ny 5′ amin'ny probe oligonucleotide.Rehefa mientanentana amin'ny loharanom-pahazavan'ny mpitaingina bisikileta, ny fluorophore dia mamoaka fluorescence.Ankoatra izany, ny probe dia ahitana ny famonoana amin'ny 3′end.Ny akaiky ny fototarazo mpanao gazety amin'ny famonoana dia manakana ny fahitana ny fluorescence.

Ao amin'ny dingana fanitarana, ny ADN polymerase dia mamorona tady vaovao.Rehefa tonga any amin'ny TaqMan ny polymerase, ny hetsika 5′nuclease endogenous dia manasaraka ny probe, manasaraka ny loko amin'ny famonoana.

Isaky ny tsingerin'ny PCR dia misy molekiolan'ny loko kokoa avoaka, ka mitombo ny hamafin'ny fluorescence mifanandrify amin'ny isan'ny amplicons natambatra.

Ity fomba ity dia ahafahana manombana ny isan'ny filaharana nomena ao amin'ny santionany.Mitombo avo roa heny isaky ny tsingerina ny isan'ny sombim-panadinana ADN.Noho izany, ny PCR dia azo ampiasaina handinihana santionany kely.

Ho fandrefesana famantarana fluorescent, jiro halogen tungstène, sivana fientanam-po, reflector, lens, sivana emission ary fiampangana fitaovana miaraka amin'ny fakan-tsary CCD.

DINGANA 4 Fantaro

Ho fandrefesana famantarana fluorescent, jiro halogen tungstène, sivana fientanam-po, reflector, lens, sivana emission ary fiampangana fitaovana miaraka amin'ny fakan-tsary CCD.

Ny hazavana voasivana avy amin'ny jiro dia taratry ny reflector, mandalo amin'ny family condenser, ary mifantoka amin'ny afovoan'ny lavaka tsirairay.Avy eo ny fluorescence mivoaka avy amin'ny lavaka dia hita taratra avy amin'ny fitaratra, mandalo amin'ny sivana emission, ary hitan'ny fakantsary CCD.Ao amin'ny tsingerin'ny PCR tsirairay, ny jiro fluorophore mientanentana tena dia mety ho hitan'ny CCD.

Izy io dia mamadika ny hazavana azo ho angona nomerika.Ity fomba ity dia antsoina hoe PCR amin'ny fotoana tena izy, ary mamela ny fanaraha-maso ara-potoana ny fandrosoan'ny fihetsiky ny PCR.