Vao haingana aho no nahita zavatra mahagaga!Maro amin'ireo manam-pahaizana momba ny andrana efa mandroso manodidina azy no tsy mahalala hevitra momba ny fahalalana andrana tena fototra.

Azonao valiana, ohatra, ireto fanontaniana manaraka ireto?

Misy fahasamihafana ve eo amin'ny OD260 sy A260?Inona no dikan'ny tsirairay?
Ny OD dia fanafohezana ny hakitroky optika (density optika), ny A dia fanafohezana ny absorbance (absorbance), ny foto-kevitra roa dia iray ihany, ny "density optika" dia ny "absorbance", fa ny "density optika" dia mifanaraka amin'ny ankamaroan'ny fenitra nasionaly ary manara-penitra kokoa.

Matetika isika dia mandrefy ny sandan'ny OD amin'ny 260nm mba hanombanana ny fifantohana amin'ny asidra nokleika, ka inona no asehon'ny 1OD?
Ny asidra nucleic dia manana tampon'ny absorption ambony indrindra amin'ny halavan'ny onjam-pandrefesana 260nm, izay misy ADN sy ARN, ary koa ny sombintsombiny asidra nokleika (io no teboka manan-danja).
Ny sandan'ny OD refesina amin'ny halavan'ny onjam 260 nm dia voarakitra ho OD260.Raha madio ny santionany, ny sandan'ny OD260 dia afaka manisa ny fifantohana amin'ny santionan'ny asidra nukleika.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (ADN misy tady roa)
=37 μg/ml ssDNA (ADN tokana)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
Misy fifandraisana sy fahasamihafana ve eo amin'ny RT-PCR, Realtime-PCR ary QPCR?
RT-PCR dia fohy ho an'ny Reverse Transcription PCR
PCR Real Time=qPCR, fanafohezana ny Quantitative Real Time PCR
Na dia toa nohafohezina ho RT-PCR aza ny PCR Real Time (PCR quantitative fluorescent tena izy) sy PCR Reverse Transcription (PCR transcription mivadika).Saingy ny fivoriambe iraisam-pirenena dia: RT-PCR dia manondro manokana ny PCR transcription mivadika.

Inona avy ireo nt, bp, ary kb ampiasaina matetika hamaritana ny halavan'ny ADN/RNA amin'ny biolojia?
nt = nucleotide
bp = mpivady fototra
kb = kilobase

Mazava ho azy fa hilaza ianao fa maro ny olona tsy miraharaha an'ireo tsipiriany madinika ireo!Manao izany ny rehetra, ary tsy hisy hanontany anao hoe inona izany.Fantatrao fa tsy ilaina izany, sa tsy izany?

Tsia, Tsia, Tsia, tena ilaina ny mahafantatra izany!noho ny inona?
Satria te handefa lahatsoratra ianao!Rahalahy!Na mikasa ny hahazo diplaoma ianao na mikatsaka ny zava-bita amin'ny fikarohana siantifika, dia tsy maintsy miantehitra amin'ny lahatsoratra hiteny ianao!

Ny fitrandrahana asidra nokleika dia tokony ho fanandramana tsotra sy fototra indrindra.Ny kalitaon'ny fitrandrahana asidra nokleika dia mamaritra mivantana ny vokatry ny andrana manaraka.

Na dia efa nolazaiko imbetsaka aza izany dia mbola maro ny namana tsy miraharaha.Nanapa-kevitra ny hiala tamin'ilay lahatsoratra aho tamin'ity indray mitoraka ity!

Fampahalalana kely indrindra ho an'ny famoahana ny andrana PCR amin'ny fotoana tena izy, antsoina hoe MIQE, dia andiana toro-làlana momba ny fanandramana fatran'ny fluorescence natomboka iraisam-pirenena, izay manolotra fenitra farafahakeliny ho an'ny fampahalalana andrana ilaina amin'ny fanombanana ny andrana PCR fatran'ny fluorescence sy ny famoahana lahatsoratra.Amin'ny alàlan'ny fepetra andrana sy ny fomba famakafakana nomen'ny mpanandrana, ireo mpandinika dia afaka manombana tsara kokoa ny fahamarinan'ny tetika andrana ataon'ny mpikaroka.

Hita fa ao amin'ny fizarana momba ny fitrandrahana asidra nokleika, dia natolotra ireto singa fitiliana manaraka ireto,

Ny "E" dia manondro fampahalalana tsy maintsy omena ary ny "D" dia manondro fampahalalana tokony homena raha ilaina.

Ny endrika dia tena sarotra, raha ny marina, tiako ny milaza fa ny tsirairay dia mila manomboka amin'ny

fahadiovana (D), vokatra (D), fahamendrehana (E) ary tsy miovaova (E) mba hanombanana ny asidra nukleika amin'ireo lafiny efatra ireo.

Araka ny fahazarana andrana, resaho aloha ny fomba fanombanana ny fahadiovana sy ny fifantohana.

Ny fandrefesana OD no fomba fitadiavana ankafizina indrindra sy mora indrindra ho an'ny mpanandrana.Raha ny principe dia tsy hiditra amin'ny antsipiriany eto aho.Maro amin'ny laboratoara izao no mampiasa ultra-micro spectrophotometers mba handinihana mivantana ny santionan'ny asidra nokleika.Raha mampiseho ny sandan'ny absorbance, ny programa dia manome mivantana ny sandan'ny fifantohana (asidra nucleic, proteinina ary loko fluorescent) sy ny tahan'ny mifandraika amin'izany.Raha ny famakafakana ny sandan'ny OD dia Tehirizo ity sary ity dia ho salama ianao.

Lisitry ny vahaolana sandan'ny OD manerantany

Na izany aza, misy ny fampitandremana vitsivitsy izay tokony havoaka mitokana ho anao.

(Raha ny tena izy, fantatro fa tsy maintsy ianao no mitahiry ary miandry mandra-pahatonganao mila azy ireo!)

Fanamarihana 1 Fitaovana

Ny sandan'ny OD dia hisy fiantraikany amin'ny fitaovana samihafa.Raha mbola ao anatin'ny faritra iray ny OD260 dia misy dikany ny sandan'ny OD230 sy OD280.Ohatra, ny haavon'ny absorbance amin'ny Eppendorf D30 mahazatra amin'ny 260nm dia 0 ~ 3A, ary ny NanoDrop One of Thermo dia ao amin'ny 260nm.Ny isan-karazany absorbance ny 0.5 ~ 62.5A.

Fanamarihana 2Dilution reagent

Ny sandan'ny OD dia mety hisy fiantraikany amin'ny fandotoana ny reagents samihafa.Ohatra, ny famakiana OD260/280 momba ny ARN voadio amin'ny pH7.5 10mM TrisNy buffer dia eo anelanelan'ny 1.9-2.1, raha ao anatyvahaolana tsy miandany ranony tahan'ny dia ho ambany, angamba 1.8-2.0 ihany, fa tsy midika izany fa ny kalitaon'ny ARN manova Difference.

Fanamarihana 3Ny sisa tavela

Ny fisian'ny akora sisa tavela dia hisy fiantraikany amin'ny fahamarinan'ny fandrefesana asidra nokleika, noho izany dia ilaina ny misoroka ny proteinina, phenol, polysaccharide ary polyphenol amin'ny santionan'ny asidra nokleika araka izay azo atao.

Na izany aza, raha ny marina, ny fitrandrahana amin'ny reagents organika dia fomba taloha.Ao amin'ny kitapo ara-barotra, ny vokatra fitrandrahana dia azo atao amin'ny alàlan'ny tsanganana adsorption mifototra amin'ny silica miaraka amin'ny centrifugation, manalavitra ireo reagents organika misy poizina sy manimba izay sarotra esorina, sns. Ny olana, toy nyNy kitapo fitrandrahana asidra nokleika an'i Foregene, dia tsy mampiasa DNase/RNase sy reagents organika misy poizina mandritra ny fandidiana, haingana sy azo antoka., ary nyny effect diatsara(tsy nahy nilaza fa sola, fa fantatro fa tianao ho fantatra).

Ohatra 1: Ny fitrandrahana ADN génomika sy ny fahadiovana

Ny Foregene Soil ADN Isolation Kit (DE-05511) dia mitsabo ny santionan'ny tany avy amin'ny loharano isan-karazany, ary ny habetsahana sy ny fahadiovan'ny ADN génômika azo dia aseho amin'ity tabilao manaraka ity:
Ohatra 2: Ny vokatra azo avy amin'ny fitrandrahana RNA sy ny fahadiovana

Ny Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) dia nanamboatra santionany isan-karazany, ary ny habetsahana sy ny fahadiovan'ny ARN azo dia aseho amin'ny tabilao etsy ambany (ho an'ny tadin'ny totozy):
Na izany aza, aza mieritreritra fa vitanao ny sanda OD.Misy mikarakara ireo hevi-dehibe nosoritako ho anao eo aloha ve ianao?

Mariho

Ny molekiolan'ny asidra nokleika tapaka dia hokajiana ao amin'ny absorbance.Raha heverinao fa manana sisa tavela amin'ny ADN ao amin'ny RNA ianao, dia ho hita ho avo dia avo ny sandan'ny OD anao, saingy tsy azo faritana ny tena fifantohan'ny RNA.Na ny ARN-nao Tsy fantatra mazava na misy ny fahasimbana, noho izany dia mbola mila fomba fanombanana feno izahay mba hanomezana fitsarana marina kokoa, izany hoe ny fanombanana ny fahamendrehan'ny asidra nucleic voalaza ao amin'ny MIQE.