Kitapo fitokana-monina RNA totalin'ny biby. Kitapo fanalana sy fanadiovana RNA manontolo ho an'ny tavy sy sela biby
Kit Description:
Manala haingana sy mahomby ny RNA totalin'ny fahadiovana sy kalitao avo lenta avy amin'ny tavy biby isan-karazany.
Tsy mila manahy momba ny fahasimban'ny ARN.Ny rafitra manontolo dia RNase-Free
Esory amin'ny fomba mahomby ny ADN amin'ny alàlan'ny ADN-Cleaning Column
Esory ny ADN tsy misy DNase
Tsotra — vita amin'ny maripana efitrano ny asa rehetra
Haingana—afaka vita ao anatin'ny 30 minitra ny fandidiana
Safe-tsy misy reagent organika ampiasaina
Hadio madio—OD260/280≈1.8-2.1
Kits Descriptions
50 fanomanana, 200 fanomanana
Ity kitapo ity dia mampiasa nyspin column sy formulanovolavolain'ny orinasanay, izay afaka manala ny RNA totalin'ny fahadiovana sy ny kalitao avo lenta avy amin'ny tavy biby isan-karazany miaraka amin'ny fahaiza-manao avo lenta. Manome Tsanganana fanadiovana ADN mahomby izy io, izay afaka manasaraka mora foana sy manodina ny ADN génomika avy amin'ny lysate supernatant sy tissue, tsotra sy mamonjy fotoana;Ny Tsanganana RNA ihany dia afaka mamatotra tsara ny RNA ary azo karakaraina miaraka amin'ny rôle tokana Santionany maro.
Ny rafitra manontolo dia RNase-Free, mba tsy ho simba ny ARN nalaina;Buffer RW1, Buffer RW2 rafitra fanasan-damba, ka ny ARN azo dia tsy misy proteinina, ADN, ion, ary fandotoana organika.
Kit singa
| Animal Total RNA Isolation Kit | ||
| Kit singa | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer RL1* | 25ml | 100ml |
| Ampahany RL2 | 15ml | 60ml |
| Buffer RW1* | 25ml | 100ml |
| Ampahany RW2 | 24ml | 96ml |
| RNase-Free ddH2O | 10ml | 40ml |
| Tsanganana RNA ihany | 50 | 200 |
| Tsanganana fanadiovana ADN | 50 | 200 |
| Boky torolalana | 1 tapa | 1 tapa |
Fampahafantarana momba ny vokatra
| endrika | Spin column | singa fanadiovana | Andry foregene, reagent |
| marary mitsika | 1-24 santionany | Fotoana isaky ny fanomanana | ~30 min (24 santionany) |
| Centrifuge | Centrifuge birao | Fisarahana pyrolysis | Fisarahana centrifugal |
| Santionany | Tavy biby;SELA | Santionany vola | Tavy: 10-20 mg;Sela:(1-5)×106 |
| Volume elution | 50-200 μL | Habetsan'ny entana ambony indrindra | 850 μl |
Toetra & tombony
■ Tsy mila manahy momba ny fahasimban'ny ARN;RNase-Free ny rafitra manontolo
■ Esory amin'ny fomba mahomby ny ADN mampiasa ADN-Cleaning Column
■ Esory ny ADN nefa tsy ampiana DNase
■ Tsotra-ny asa rehetra dia vita amin'ny mari-pana
■ Ny asa haingana dia azo atao ao anatin'ny 30 minitra
■ Safe-tsy mila reagent organika
■ Hadio avo -OD260/280≈1.8-2.1
Fampiharana kit
Izy io dia mety amin'ny fitrandrahana sy fanadiovana ny totalin'ny ARN avy amin'ny karazana sela biby vaovao na mangatsiaka na sela kolontsaina.
Masontsivana vokatra
■ Fampiharana midina: synthesis cDNA tady voalohany, RT-PCR, kloning molekiola, Blot Avaratra, sns.
■ Santionany: tavy biby, sela kolontsaina
■ Fatra: Tissues 10-20mg, Cells(2-5)×106
■ Ny fahafaha-mamatotra ADN ambony indrindra amin'ny tsanganana fanadiovana: 80 μg
■ Volon'ny elution: 50-200 μl
Kisary
Animal Total RNA Isolation Kit tsaboina 20mg
Santionan'ny totozy vaovao, alao 5% ny totalin'ny RNA 1% agar
Glycogel electrophoresis
1: Fandehanana 2: Voa
3: Aty 4: Fo
Fitehirizana sy fitehirizana
Ny kitapo dia azo tehirizina mandritra ny 24 volana amin'ny mari-pana (15-25 ℃) na 2-8 ℃ mandritra ny fotoana maharitra.Ny buffer RL1 dia azo tehirizina amin'ny 4 ℃ mandritra ny 1 volana aorian'ny fampidirana β-mercapptoethanol (tsy voatery).
Lahatsoratra voatonona
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Nanoparticles MRNA-Loaded Lipid ho an'ny fanitsiana fototra amin'ny atiny amin'ny alàlan'ny fanatsarana ny famolavolana Central Composite.Adv.Funct.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Ny apoptose spontaneous amin'ny sela amin'ny fanomanana cellule stem therapeutic dia miteraka fiantraikany immunomodulatory amin'ny alàlan'ny famoahana phosphatidylserine.Signal Transduct Target Ther.14 Jolay 2021;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Ny fanovana N7-Methylguanosine tRNA dia manatsara ny fandikana mRNA oncogenic ary mampiroborobo ny fivoaran'ny cholangiocarcinoma intrahepatic.Mol Cell.2021 Jolay 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225: Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-Mediated m6A Modification dia manamora ny fanavaozana ny atiny amin'ny fitazonana ny Homeostasis Reticulum Endoplasmic.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA isoaltion kits ho an'ny loharano santionany hafamisy:
Cell, zavamaniry, viral, ra, sns.
Tsy nalaina ny ARN na ambany ny vokatra ARN
Matetika misy antony isan-karazany izay misy fiantraikany amin'ny fahombiazan'ny fanarenana, toy ny: ny votoatin'ny RNA santionan'ny sela, ny fomba fiasa, ny habetsahan'ny elution, sns.
1. Ny fandroana ranomandry na cryogenic (4 ° C) centrifugation dia natao nandritra ny fandidiana.
Soso-kevitra: miasa amin'ny mari-pana amin'ny efitrano (15-25 ° C) mandritra ny dingana manontolo, aza atao rano fandroana sy centrifuge amin'ny hafanana ambany.
2. Fitehirizana santionany tsy mety na fotoana fitehirizana santionany tafahoatra.
Soso-kevitra: Tehirizo ny santionany amin'ny -80 °C na atsobohy ao anaty ranon-javatra azota ary alaviro ny fampiasana ny fangatsiahana miverimberina;Andramo ny mampiasa sela vaovao na sela kolontsaina ho an'ny fitrandrahana RNA.
3. Tsy ampy santionany lysis.
Soso-kevitra: Rehefa manao homogenizing tissue, dia ataovy izay hahazoana antoka fa ny tavy dia homogenized ampy ary ny sela sela dia mizara ho ampy mba hanazavana ny famoahana ny ARN.
4. Tsy ampiana tsara ny eluent.
Soso-kevitra: Hamafiso fa RNase-Free ddH2O dia ampiana mitete tsikelikely eo afovoan'ny fonon'ny tsanganana fanadiovana.
5. Tsy nampidirina tao amin'ny Buffer RL2 na Buffer RW2 ny habetsaky ny ethanol tanteraka.
Soso-kevitra: Araho ny toromarika, ampio ny habetsahan'ny ethanol tanteraka marina amin'ny Buffer RL2 sy Buffer RW2 ary afangaro tsara alohan'ny hampiasana ilay kitapo.
6. Tsy mety ny fatran'ny santionan'ny tissue.
Soso-kevitra: Mampiasà tavy 10-20 mg na (1-5) × 106sela isaky ny 500 μl buffer RL1, satria ny fampiasana tavy be loatra dia mety hampihena ny fitrandrahana RNA.
7. Ny habetsahan'ny elution tsy mety na ny elution tsy feno.
Soso-kevitra: Ny habetsahan'ny elution ny tsanganana fanadiovana dia 50-200 μl;raha tsy mahafa-po ny vokatry ny elution, dia asaina manitatra ny fotoana fametrahana ny mari-pana ao amin'ny efitrano aorian'ny fampidirana RNase-Free ddH efa mafana.2O, ohatra mandritra ny 5-10 min.
8. Ny tsanganana fanadiovana dia manana sisa tavela amin'ny ethanol aorian'ny fanasana Buffer RW2.
Soso-kevitra: Raha misy sisa tavela amin'ny ethanol aorian'ny fanasan'ny Buffer RW2, ny centrifugation tsy misy na inona na inona mandritra ny 1min, ny fotoana ho an'ny fandidiana centrifugation tsy misy na inona na inona dia azo ampitomboina amin'ny 2min, na ny tsanganana fanadiovana dia azo apetraka amin'ny mari-pana amin'ny 5 min mba hanesorana ny ethanol sisa tavela.
Ny ARN voadio dia simba
Ny kalitaon'ny RNA voadio dia mifandraika amin'ny lafin-javatra toy ny fitehirizana ny santionany, ny fandotoana ny RNase, ary ny fanodikodinana, sns.
1. Tsy voatahiry ara-potoana ny santionan'ny tissue.
Soso-kevitra: Raha toa ka tsy ampiasaina ara-potoana ny santionany na ny sela aorian'ny fanangonana, dia mitahiry avy hatrany amin'ny -80 ° C na azota azota.Mba hanesorana ny RNA dia ampiasao tavy na sela vao nalaina raha azo atao.
2. Famerenana ny santionany amin'ny vata fampangatsiahana.
Soso-kevitra: Rehefa mitahiry santionany amin'ny tavy, dia tsara kokoa ny manapaka azy ireo ho tapatapaka kely mba hitehirizana azy, ary esory ny iray amin'ireo sombiny rehefa ampiasaina mba hisorohana ny fanalefahana ny santionany miverimberina sy ny fahasimban'ny ARN.
3. Ny RNase dia ampidirina na tsy manao fonon-tanana, saron-tava, sns mandritra ny fandidiana.
Soso-kevitra: Ny fanandramana fitrandrahana RNA dia tsara indrindra atao amin'ny efitrano fanodinkodinana RNA misaraka ary ny latabatra dia voadio alohan'ny fanandramana.
Manaova fonon-tanana sy saron-tava azo ampiasaina mandritra ny andrana mba hampihenana ny fahasimban'ny RNA vokatry ny fampidirana ny RNase.
4. Voaloto amin'ny RNase ny reagents mandritra ny fampiasana.
Soso-kevitra: Soloy miaraka amin'ny kitapo fitokana-monina Animal Total RNA vaovao ho an'ny fanandramana mifandraika amin'izany.
5. Ny fantsona centrifuge, toro-hevitra, sns ampiasaina amin'ny fanodinkodinana RNA dia voaloto amin'ny RNase.
Soso-kevitra: Hamarino fa ny fantsona centrifuge, toro-hevitra, pipettes, sns ampiasaina amin'ny fitrandrahana RNA dia tsy misy RNase.
Ny RNA voadio voadio dia misy fiantraikany amin'ny fanandramana midina
ARN nodiovin'ny tsanganana fanadiovana, raha ny sira ion, proteinina afa-po lehibe loatra dia hisy fiantraikany amin'ny downstream fanandramana, toy ny: mivadika transcription,Northern Blot et al.
1. Ny ARN nopotehina dia misy sisa tavela amin'ny sira.
Soso-kevitra: Hamarino fa nampidirina ao amin'ny Buffer RW2 ny habetsahan'ny ethanol marina ary manaova fanasan-damba 2 fanadiovana amin'ny hafainganam-pandeha centrifugal voalaza fa miasa;raha misy sisa tavela amin'ny sira, avelao ny tsanganana fanadiovana ao amin'ny Buffer RW2 mandritra ny 5 minitra amin'ny mari-pana amin'ny efitrano ary manaova centrifugation mba hanamafisana ny fanesorana ny loto sira.
2. Ny sisa tavela amin'ny ethanol ao amin'ny RNA elutioned.
Soso-kevitra: Hamafiso fa aorian'ny fanasan'ny buffer RW2, manaova ny fandidiana centrifugation tsy misy na inona na inona amin'ny hafainganam-pandehan'ny centrifugation voalaza ho an'ny fandidiana, hampitombo ny fotoanan'ny fandidiana centrifugation tsy misy na inona na inona ho 2 min raha mbola misy ny ethanol sisa tavela, na avelao amin'ny mari-pana mandritra ny 5 minitra aorian'ny centrifugation tsy misy na inona na inona mba hanamafisana ny fanesorana ny sisa tavela amin'ny ethanol.
