Manana toe-tsaina tsara sy mandroso amin'ny fahalianan'ny mpanjifa izany, ny fikambananay dia manatsara hatrany ny kalitaon'ny vokatra mba hanomezana fahafaham-po ny fangatahan'ny mpiantsena ary mifantoka bebe kokoa amin'ny fiarovana, ny fahamendrehana, ny fepetra momba ny tontolo iainana, ary ny fanavaozana ny Factory Supply China Convenient and Quick Rt-PCR Dspathtm 4X One-Step Multiplex Master Mix, Ny mpiasa sarotra za-draharaha dia mety hanohana anao amin'ny fo manontolo.Faly miarahaba anao izahay mba hitsidika ny tranokalanay sy ny orinasanay ary alefaso aminay ny fanontanianao.
Izany dia manana toe-tsaina tsara sy mandroso amin'ny fahalianan'ny mpanjifa, ny fikambananay dia manatsara hatrany ny kalitaon'ny vokatra mba hanomezana fahafaham-po ny fangatahan'ny mpividy ary mifantoka bebe kokoa amin'ny fiarovana, ny fahatokisana, ny famaritana ny tontolo iainana ary ny fanavaozana nyChina Taq DNA Polymerase, Qpcr, Manana ny vahaolana tsara indrindra izahay izao ary ny varotra mahay sy ny ekipa ara-teknika. Miaraka amin'ny fampandrosoana ny orinasa, dia afaka manome mpanjifa vokatra tsara indrindra, fanohanana ara-teknika tsara, tonga lafatra aorian'ny varotra.

Famaritana

Ity kitapo ity dia mampiasa rafitra lysis buffer tokana izay afaka mamoaka haingana ny RNA avy amin'ny santionan'ny sela kolontsaina ho an'ny fanehoan-kevitra RT-qPCR, ka manafoana ny fizotran'ny fanadiovana RNA mandany fotoana sy miasa.Ny môdely RNA dia azo alaina ao anatin'ny 7 minitra monja.Ny 5×Direct RT Mix sy ny 2×Direct qPCR Mix-SYBR reagents nomen'ny kitapo dia afaka mahazo haingana sy mahomby ny valin'ny PCR amin'ny fotoana tena izy.

5 × Direct RT Mix sy 2 × Direct qPCR Mix-SYBR dia manana fandeferana mahery vaika, ary ny lysate ny santionany dia azo ampiasaina ho modely ho an'ny RT-qPCR mivantana.Ity kitapo ity dia misy ny RNA tsy manam-paharoa amin'ny Foregene reverse transcriptase, ary Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl₂, réaction buffer, PCR optimizer ary stabilizer.

fepetra arahana

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Kit singa

Toetra & tombony

■ Tsotra sy mahomby : miaraka amin'ny teknolojian'ny Cell Direct RT, ny santionan'ny RNA dia azo alaina ao anatin'ny 7 minitra monja.

■ Kely ny fitakiana santionany, hatramin'ny sela 10 no azo andrana.

■ Fampidirana avo lenta: afaka mamantatra haingana ny RNA ao amin'ny sela kolontsaina ao amin'ny takelaka 384, 96, 24, 12, 6-lavadrano izy.

■ ADN Eraser dia afaka manala haingana ireo génome navoaka, mampihena be ny fiantraikan'ny voka-panadinana manaraka.

■ Optimized RT sy qPCR rafitra mahatonga ny roa-dingana RT-PCR transcription mivadika ho mahomby kokoa sy PCR manokana kokoa, ary mahatohitra kokoa RT-qPCR fanehoan-kevitra inhibitors.

Fampiharana kit

Fampiharana: cellule cultié.

- RNA navoakan'ny santionany lysis: azo ampiharina amin'ny maodely RT-qPCR an'ity kitapo ity ihany.

- Ny kitapo dia azo ampiasaina amin'ireto tanjona manaraka ireto: famakafakana fanehoana ny fototarazo, fanamarinana ny vokatry ny fampanginana ny fototarazo mpanelanelana siRNA, fitiliana zava-mahadomelina, sns.

Kisary

Fitehirizana sy ny fiainana talantalana

Ny ampahany I amin'ity kitapo ity dia tokony hotehirizina amin'ny 4 ℃;Ny ampahany II dia tokony hotehirizina amin'ny -20 ℃.

Ny Foregene Protease Plus II dia tokony hotehirizina amin'ny 4 ℃, aza mangatsiaka amin'ny -20 ℃.

Reagent 2×Direct qPCR Mix-SYBR dia tokony hotehirizina amin'ny -20 ℃ ao anaty haizina;raha ampiasaina matetika, dia azo tehirizina ao amin'ny 4 ℃ ihany koa ho an'ny fitehirizana fohy (ampiasaina ao anatin'ny 10 andro).Izay manana toe-tsaina tsara sy mivoatra amin'ny fahalianan'ny mpanjifa, ny fikambananay dia manatsara hatrany ny kalitaon'ny vokatra mba hanomezana fahafaham-po ny fangatahan'ny mpiantsena ary mifantoka bebe kokoa amin'ny fiarovana, ny fahamendrehana, ny fepetra momba ny tontolo iainana, ary ny fanavaozana ny Factory Supply China Convenient and D Quick Rt-Ptepx Works. amin'ny fonao manontolo.Faly miarahaba anao izahay mba hitsidika ny tranokalanay sy ny orinasanay ary alefaso aminay ny fanontanianao.
Famatsiana orinasaChina Taq DNA Polymerase, Qpcr, Manana ny vahaolana tsara indrindra izahay izao ary ny varotra mahay sy ny ekipa ara-teknika. Miaraka amin'ny fampandrosoana ny orinasa, dia afaka manome mpanjifa vokatra tsara indrindra, fanohanana ara-teknika tsara, tonga lafatra aorian'ny varotra.

Ny tena fotoana PCR fototra famolavolana fitsipika

Primer mandroso sy miverina

Ho an'ny PCR Real Time, ny famolavolana primer dia tena zava-dehibe.Ny Primers dia mifandray amin'ny maha-tokana sy ny fahombiazan'ny PCR amplification, ary azo namboarina miaraka amin'ireto fitsipika manaraka ireto:

Halavany voalohany: 18-30bp.

GC afa-po: 40-60%.

Sanda Tm: Ny lozisialy fandrafetana voalohany, toy ny Primer 5, dia afaka manome ny sanda Tm an'ny primer.Tokony ho akaiky araka izay azo atao ny sandan'ny Tm an'ny primer ambony sy ambany.Azo ampiasaina koa ny raikipohy kajy Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Rehefa manao PCR, ny mari-pana eo ambanin'ny sandan'ny Tm voalohany amin'ny 5 °C dia voafantina amin'ny ankapobeny ho mari-pana fanalefahana (ny fitomboana mifanaraka amin'ny mari-pana fanalefahana dia mety hampitombo ny fahasamihafan'ny fihetsiky ny PCR).

Primers sy PCR vokatra:

Ny halavan'ny vokatra fanamafisam-peo PCR voalohany indrindra dia 100-150bp.

Ny famolavolana primers ao amin'ny faritra ara-drafitra faharoa amin'ny môdely dia tokony hohalavirina araka izay azo atao.

Halaviro ny fiforonan'ny fototra mifameno 2 na mihoatra eo anelanelan'ny tendrony 3′ amin'ireo primera ambony sy ambany.

Primer 3′ terminal base dia tsy afaka manatrika miaraka amin'ny 3 fanampiny G na C misesy.

Ny primer dia tsy afaka manana rafitra mifameno, raha tsy izany dia hiforona ny firafitry ny volo, izay misy fiantraikany amin'ny fanamafisana ny PCR.

Ny ATCG dia tokony hozaraina araka izay azo atao amin'ny filaharana voalohany, ary ny tobin'ny terminal 3' dia tokony hohalavirina toy ny T.

Fanampiny 1: Fonosana fanampin'ny singa RT-qPCR Kit Cell Direct

1.Cell Lysis Solution